[發明專利]一種宮內膜采集裝置及采集方法和宮內膜干細胞收獲方法

有效

• 申請號: 202011016698.8
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112111447B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 郝建秀;曹毓琳;林俊堂;滕睿頔;趙秀梅;白志惠
• 申請（專利權）人: 北京臻惠康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12M1/12;C12M1/00;C08J7/12;C08J3/12;C08L5/04
• 代理公司: 北京卓愛普專利代理事務所(特殊普通合伙) 11920
• 代理人: 王玉松

1.一種宮內膜采集裝置，其特征在于，所述宮內膜采集裝置包括頂端開口的杯體（1），所述杯體（1）上設有截流膜（5），所述截流膜（5）與所述杯體（1）形成第一腔室，所述第一腔室內設有微載體（4），所述截流膜（5）的孔徑小于所述微載體（4）的粒徑；

所述微載體（4）的制備方法包括如下步驟：

（1）制球：將濃度為1%-2%的納米化海藻酸鈉溶液滴入濃度為0.5%-3%的氯化鈣溶液中反應生成海藻酸鈣膠珠，所述納米化海藻酸鈉溶液與所述氯化鈣溶液的體積比為1:3-1:5；

（2）洗滌：除去多余的氯化鈣溶液，用無菌純化水洗滌一次；

（3）包被：將濃度為10%-20%的吸附溶液和濃度為0.3%-1%的戊二醛溶液等比例混合均勻制得混合液，將所述海藻酸鈣微膠珠浸泡在所述混合液中反應，所述混合液與納米化海藻酸鈉溶液的體積比為1-3:1；

（4）洗滌：待所述包被反應結束后，除去多余的混合液，用無菌純化水洗滌三次；

（5）中和：加入濃度為0.5%-2%的甘氨酸溶液反應，所述甘氨酸溶液的體積與步驟（3）所述的混合液體積相同；

（6）洗滌：棄反應后的廢液，用無菌純化水洗滌三次；

（7）偶聯DEAE-HCl：取洗滌后的海藻酸鈣微膠珠，加入濃度為1-3mol/L的NaOH溶液攪拌，再加入濃度為0.5-2mol/L的DEAE-HCl溶液進行攪拌；所述海藻酸鈣微膠珠的體積與NaOH溶液的體積和DEAE-HCl溶液的體積的比值為1:1-3:1-3；

（8）洗滌：除去多余的NaOH溶液和DEAE-HCl溶液，依次用無菌純化水、0.1M鹽酸、0.1mM鹽酸、無Ca²⁺和Mg²⁺的PBS緩沖液洗滌，每次洗滌均以300rpm的轉速攪拌8min后放出洗滌液，所用無菌純化水、0.1M鹽酸、0.1mM鹽酸、無Ca²⁺、Mg²⁺PBS緩沖液與海藻酸鈣微膠珠的體積比例均為1-3:1，制得濕潤微載體；

（9）凍干：將步驟（8）所得到的微載體凍干得到微載體；

所述吸附溶液是將吸附因子用水溶解制得的；

所述吸附因子包括質量比為1-2:1-2:5-10的殼聚糖、纖連蛋白和明膠。

2.如權利要求1所述的宮內膜采集裝置，其特征在于，所述第一腔室連通有排放管（2），所述排放管（2）上設有開關閥（3）。

3.如權利要求2所述的宮內膜采集裝置，其特征在于，所述排放管（2）連通于所述杯體（1）的底端。

4.如權利要求1所述的宮內膜采集裝置，其特征在于，所述杯體（1）由乳膠、醫用硅膠或者熱塑性塑料制成，所述微載體的粒徑為200-500微米，所述截流膜（5）的孔徑為100微米或50微米，所述截流膜（5）為微孔濾膜。

5.如權利要求1所述的宮內膜采集裝置，其特征在于，所述截流膜（5）由四周到中間與所述杯體（1）底部之間的距離逐漸減小。

6.如權利要求1所述的宮內膜采集裝置，其特征在于，所述截流膜（5）與所述杯體（1）還形成有第二腔室，所述第二腔室位于所述第一腔室上方。

7.一種宮內膜采集裝置的采集方法，其特征在于，所述宮內膜采集方法包括以下步驟：

S1吸附：使用權利要求1所述的宮內膜采集裝置吸附經血，所述微載體包括可降解微載體基質材料交聯成的凝膠球芯、包被于所述球芯的吸附因子層、偶聯于所述吸附因子上的DEAE；

S2保存：打開開關閥，將吸附有經血的微載體用濾網過濾、除去血液，再將微載體放置于保護液內；

所述保護液是將低氧保護劑、支原體抑制劑以及氨基糖苷類抗生素用濃度為20-45mg/ml的DMEM/F12培養基水溶液溶解而成，每毫升所述DMEM/F12培養基水溶液分別溶解所述低氧保護劑3-15mg、所述支原體抑制劑1-35mg以及氨基糖苷類抗生素100-500U。