[發明專利]一種包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇及其制備和應用

有效

• 申請號: 202011016540.0
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112294776B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 沈明武;郭云琦;范鈺;史向陽
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K47/04;A61K31/704;A61P35/00;A61K49/00
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 魏峯;黃志達

本發明涉及一種包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇及其制備和應用。該制備方法包括：熒光碳點制備，還原響應型碳點納米團簇溶液制備，負載阿霉素的碳點納米團簇制備，B16細胞膜懸液制備，包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇制備。該方法工藝簡單，反應條件簡單，易于操作分離，具有良好的發展前景；制備的包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇通過尾靜脈注射進入小鼠體內后，具有顯著的抗腫瘤效果，具有潛在臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于響應型納米藥物載體及其制備和應用領域，特別涉及一種包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇及其制備方法和應用。

背景技術

目前，癌癥已成為威脅人類生存與健康的主要因素。對于中晚期癌癥，化療是最主要、最有效的治療手段，但傳統化療在殺死癌細胞的同時對正常組織和器官造成了強烈的毒副作用。臨床使用的化療藥物，如：阿霉素、紫杉醇等，由于水溶性差、代謝快等局限性大大降低了其療效。因此，通過納米材料負載化療藥物構建的納米平臺可向腫瘤部位靶向遞送藥物，并實現腫瘤微環境響應性釋放藥物，降低對正常組織的毒副作用，提高化療療效。在眾多納米材料中，碳點由于其熒光特性及可作為藥物載體而備受青睞。

碳點是一類尺寸小于10nm的新型碳納米材料，具有生物相容性好、水溶性好、穩定性好、高度熒光可調性等特點，因此在熒光成像方面具有很好的應用前景，已有文獻將制備出的碳點用于腦膠質瘤的精準熒光成像(Min Qian,et al.ACS Appl.Mater.Interfaces,2018,10,4031-4040)。由于碳點表面有多種官能團，例如帶負電的羧基、羥基等，因此可與表面帶有正電荷的化療藥物(例如阿霉素等)通過非共價作用相互結合，作為藥物載體用于腫瘤的化療。本課題組之前的文獻報道(Dan Li,et al.J.Mater.Chem.B,2019,7(2),277-285)，將第五代樹狀大分子與負載有阿霉素的碳點相結合，構建了雜化納米平臺用于克服多藥耐藥性化療的研究。大多數納米粒子在進入體內后只能停留在血管周圍而無法進入到腫瘤中心區域，滲透性較差，這極大地限制了納米藥物的治療效果。單分散的碳點尺寸較小，易在腫瘤組織中擴散，可促進負載的藥物向腫瘤內部滲透，但其由于尺寸小而導致EPR效應較弱，且容易通過腎臟代謝而被迅速清除。因此，設計一種尺寸合適的團簇型碳點，在到達腫瘤微環境后能夠響應解離，進而提高藥物在腫瘤部位的釋放量和滲透性非常關鍵。

近年來，生物仿生技術，尤其是細胞膜仿生偽裝的納米載體，由于其優異的生物相容性、低免疫原性，可有效避免單核巨噬細胞系統以及網狀內皮系統對納米載體的捕獲清除，增加載體的體內循環時間，便于載體在腫瘤部位富集。惡性腫瘤細胞膜，基于腫瘤細胞的體外易培養性，便于收集大量腫瘤細胞，將細胞DNA等細胞器去除后，失去了致癌性，收集到的癌細胞膜可用于仿生偽裝納米載體。由于癌細胞膜表面存在免疫逃避蛋白和同源靶向蛋白，基于癌細胞膜包裹的納米載體可以避免免疫清除并具備主動靶向至腫瘤部位的能力，從而實現對腫瘤的靶向治療。例如Xie等制備了腫瘤細胞膜包裹的二氧化硅納米顆粒用于靶向遞送藥物至腫瘤部位，以實現更好的抗腫瘤效果(Wei Xie,et al.ACS Nano,2019,13,2849-2857)。

檢索國內外文獻和專利，尚未發現關于包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇的制備，以及通過非共價作用負載阿霉素(DOX)用于生物體內腫瘤化療的相關報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇及其制備方法和應用，以克服現有技術中碳點載藥治療腫瘤效果不佳的缺陷。

本發明提供一種包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇，所述載藥納米團簇是將熒光碳點通過交聯劑交聯形成碳點納米團簇，然后負載阿霉素，并進一步包覆黑色素瘤細胞膜得到。

所述熒光碳點是將4-氨基水楊酸懸濁液進行水熱反應，離心、過濾，冷凍干燥得到。

本發明還提供一種包覆細胞膜的還原響應型碳點載藥納米團簇的制備方法，包括：