[發明專利]胃癌檢測用的內參miRNA、應用及試劑盒

在審

• 申請號: 202011015916.6
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112266958A
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發明（設計）人: 陳璇;柴可群;費寶瑩;吳人照;余志紅;朱佳杰;任澤明;童曄玲;陳思思;薛曉敏;李毓
• 申請（專利權）人: 浙江省中醫藥研究院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/113
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發明公開了一種胃癌檢測用的內參miRNA、應用及試劑盒。胃癌檢測用的內參miRNA為miRNA rno?let?7g?5p或rno?miR?429，其中，rno?let?7g?5p的序列為：5’?UGAGGUAGUAGUUUGUACAGUU?3’，rno?miR?429的序列為：5’?UAAUACUGUCUGGUAAUGCCGU?3’。本發明胃癌檢測用的內參miRNA是通過高通量測序能在全基因組范圍內篩選到相對最穩定的內參，并經過了RT?qPCR驗證，可以用于作為RT?qPCR檢測時的內參。

技術領域

本發明涉及生物技術檢測技術領域，特別是涉及一種胃癌檢測用的內參 miRNA、應用及試劑盒。

背景技術

胃癌屬于消化系統常見病，無論在全球還是在我國，胃癌發病率和致死率在所有惡性腫瘤中均排名第五和第三，嚴重威脅人類健康。雖然我國胃癌病人的五年生存率已經提升到35.9％，仍遠低于韓國的68.9％的五年生存率(Claudia Allemani,TomohiroMatsuda,Veronica Di Carlo,Rhea Harewood,Melissa Matz, Majaetal.Global surveillance of trends in cancer survival 2000–14 (CONCORD-3):analysis of individual records for 37513025patients diagnosed with one of18cancers from 322population-based registries in 71countries.The Lancet,2018,391(10125):1023-1075.)。我國胃癌高發，占全球新發病例總數的近一半。胃癌的治療困難重重，但其發生及進展經歷一個漫長的過程，其診斷和早期治療是降低胃癌死亡率的關鍵。

高通量測序技術又稱深度測序技術，近十余年來逐漸興起，在基礎研究和臨床研究領域得到廣泛應用。該技術測序通量大，可實現在全基因組范圍內檢測基因的表達的目的。

miRNA是一類約22個核苷酸的非編碼RNA，通過在轉錄后水平調控基因的表達參與諸多關鍵的生理和病理過程，具有高度保守性、時序性和組織特異性，在很多疾病的診斷和治療中發揮重要作用(Benjamin P.Lewis,Christopher B. Burge,DavidP.Bartel.Conserved Seed Pairing,Often Flanked by Adenosines, Indicates thatThousands of Human Genes are MicroRNA Targets[J].cell,2005, 120(1):0-20.)，是胃癌發病機理及其治療藥物候選靶標研究中的重要環節。

熒光定量PCR(RT-qPCR)技術廣泛應用于基因表達研究中(Livak KJ andSchmittgen TD.(2001)Analysis of relative gene expression data using real-timequantitative PCR and the 2-ΔΔCT method.Methods,25,402-408.)。基因表達水平的標準化對于準確的表達分析至關重要(A,Thulke S,Mackay IM,Landt O,SiegertW and Nitsche A.(2004)Guideline to reference gene selection for quantitativereal-time PCR.Biochemical and Biophysical Research Communications,313,856-862.)。許多假定穩定表達的所謂管家基因在某些實驗條件下或某些器官中可能不穩定。因此，在實驗中篩選表達恒定的內參 miRNA，是準確比較目的miRNA表達水平差異的前提。