[發明專利]一種用于測定毛竹筍組織細胞線粒體呼吸的試劑盒及方法在審
| 申請號： | 202011015221.8 | 申請日： | 2020-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN112229949A | 公開（公告）日： | 2021-01-15 |
| 發明（設計）人： | 盧存福;王曉靜;陳玉珍;耿新 | 申請（專利權）人： | 北京林業大學 |
| 主分類號： | G01N33/00 | 分類號： | G01N33/00 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 孫怡 |
| 地址： | 100083 北京市*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 測定 毛竹 組織細胞 線粒體 呼吸 試劑盒 方法 | ||
1.一種用于測定毛竹筍組織細胞線粒體呼吸的試劑盒，包括呼吸緩沖液和呼吸抑制劑，其特征在于，所述呼吸抑制劑包括細胞色素呼吸抑制劑和抗氰呼吸抑制劑中的至少一種；
其中，所述呼吸緩沖液中含有4～6mM KH2PO4，8～15mM TES，8～15mM NaCl，2～5mMMgSO4，溶劑為水，PH值為7.2±0.2；
所述細胞色素呼吸抑制劑為包含NaN3、溶劑為蒸餾水的溶液；在將細胞色素呼吸抑制劑加入所述呼吸緩沖液后，NaN3的終濃度為40～60mM；
所述抗氰呼吸抑制劑為包含SHAM、溶劑為乙醇的溶液；在將抗氰呼吸抑制劑加入所述呼吸緩沖液后，SHAM的終濃度為4～6mM。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括打孔器，用于從毛竹筍樣品中取得直徑為2～3mm，厚度為150～700μm的測試樣品。
3.一種毛竹筍組織細胞線粒體呼吸的測定方法，其特征在于，控制測試樣品的直徑為2～3mm，厚度為150～700μm；采用Seahorse XF96細胞代謝分析儀進行測試；
測試中所用的呼吸緩沖液中含有4～6mM KH2PO4，8～15mM TES，8～15mM NaCl，2～5mMMgSO4，溶劑為水，PH值為7.2±0.2；
測試中所用的呼吸抑制劑包括細胞色素呼吸抑制劑和抗氰呼吸抑制劑中的至少一種；
所述細胞色素呼吸抑制劑為包含NaN3、溶劑為蒸餾水的溶液；在將細胞色素呼吸抑制劑加入所述呼吸緩沖液后，NaN3的終濃度為40～60mM；
所述抗氰呼吸抑制劑為包含SHAM、溶劑為乙醇的溶液；在將抗氰呼吸抑制劑加入所述呼吸緩沖液后，SHAM的終濃度為4～6mM。
4.根據權利要求3所述的測定方法，其特征在于，進行呼吸測試時的程序設置為：混合3min，等待4min，測定5min，共11個循環。
5.根據權利要求3或4所述的測定方法，其特征在于，從同一個毛竹筍的不同部位獲取多個測試樣品。
6.根據權利要求5所述的測定方法，其特征在于，所述測定方法包括如下步驟：水化探針板、添加樣品粘合劑、樣品的制備與粘連、添加呼吸緩沖液和呼吸抑制劑、進行呼吸測試。
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