[發明專利]PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白及其構建方法、應用有效
| 申請號： | 202011014743.6 | 申請日： | 2020-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN112111015B | 公開（公告）日： | 2021-12-07 |
| 發明（設計）人： | 秦楓;蔣洪嬌;周志瓊;顏松;張小飛;周玥;黃敬雙;張偉;萬文琴;鮮靜;吳斌 | 申請（專利權）人： | 蘇州攜創生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10;G01N33/68 |
| 代理公司： | 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220 | 代理人： | 唐邦英 |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市中國(江蘇)自由貿易*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | pla2r c1q thsd7a 融合 蛋白 及其 構建 方法 應用 | ||
1.PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.一種編碼如權利要求1所述的 PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.一種含有如權利要求2所述基因的重組質粒。
4.一種含有如權利要求3所述重組質粒的哺乳細胞。
5.一種含有如權利要求1所述PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白的試劑盒。
6.如權利要求1所述的 PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、依次連接PLA2R、THSD7A、C1q核苷酸序列獲得目的基因，C1q重復三次，其中，PLA2R、THSD7A之間加入Linker序列，THSD7A、C1q之間加入Linker序列，相鄰C1q之間加入Linker序列；
S2、在目的基因前加入真核KOZAK序列，在上游加入限制性核酸內切酶位點BamⅠ，在下游加入NotⅠ酶切位點，C端加入6*His標簽序列，并根據哺乳細胞偏好性設計全序列基因；
S3、將步驟S2獲得的全序列基因與質粒進行雙酶切獲得酶切產物；
S4、將步驟S3獲得的酶切產物通過T4連接酶連接，得到重組質粒；
S5、將重組質粒在哺乳細胞中表達獲得PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白。
7.根據權利要求6所述的 PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白的構建方法，其特征在于，還包括對PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白的篩選、純化。
8.如權利要求1所述的 PLA2R、C1q、THSD7A融合蛋白或如權利要求5所述試劑盒在制備膜性腎病免疫診斷試劑中的應用。
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