[發明專利]一種發酵生產D-泛酸的方法

有效

• 申請號: 202011014094.X
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112126662B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 鄒樹平;柳志強;鄭裕國;牛坤;周海巖;王之見;趙闊
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P13/02
• 分類號: C12P13/02;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

1.一種發酵生產D-泛酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)活化培養：將保藏號為CCTCC NO：M2018914的大腸桿菌接種到平板培養基上活化培養，得到活化菌；

(2)種子培養：將步驟(1)得到的活化菌接種于種子培養基中進行種子培養，得到種子液；

(3)將種子液接種到發酵培養基中發酵培養生產D-泛酸，發酵時攪拌轉速400-700r/min；通過攪拌和通風控制溶氧在10-25％；通過流加氨水控制pH在6.5-7.0；培養溫度25.0～32.0℃；發酵前期，時間為0-13h，不控制葡萄糖濃度；發酵中期，時間為13-29h，往發酵罐中流加補料培養基，控制葡萄糖濃度為0.8-1.2g/L；發酵后期，時間為29h以后，控制葡萄糖濃度為4.5-5.5g/L；開始流加補料培養基后，同時往發酵罐中流加異亮氨酸水溶液，所述異亮氨酸水溶液的濃度為35-55g/L，直至發酵結束添加的異亮氨酸的總量為34-45g；流加后發酵液中異亮氨酸濃度為0.015-0.025g/L；

步驟(3)中發酵培養基為：葡萄糖18-22g/L，硫酸銨12-16g/L，酵母提取物1.5-2.5g/L，磷酸二氫鉀0.6-0.8g/L，硫酸鎂0.4-0.6g/L，β-丙氨酸1.2-2g/L，碳酸鈣8-12g/L，VB120.001g/L，VB1 0.001g/L，鹽溶液1mL/L，絲氨酸100-150mg/L，異丙基硫代半乳糖苷0.1mmol/L；

步驟(3)中補料培養基為：葡萄糖500g/L，硫酸鎂8g/L，磷酸二氫鉀14g/L，β-丙氨酸40g/L，硫酸銨10g/L，VB12 0.002g/L，VB1 0.005g/L，Ile 0.08g/L，絲氨酸100mg/L，鹽溶液2mL，IPTG 1mmol/L；

所述鹽溶液為：CuCl₂ 10g/L、FeSO₄·7H₂O 10g/L、ZnSO₄·7H₂O 1g/L、CuSO₄ 0.20g/L、NiCl₂·7H₂O 0.02g/L。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中平板培養基為：蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L、瓊脂粉20g/L，pH＝6.8-7.0。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中種子培養基為：蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L，pH＝6.8-7.0。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中種子液接種量為發酵培養基體積的6-15％。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(3)中種子液接種量為發酵培養基體積的8-12％；溶氧控制在在14-18％；通過流加氨水控制pH在6.8-7.0；培養溫度控制在29.0～31.0℃。