[發(fā)明專利]分泌抗Wnt-7a單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其單抗、應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011013978.3
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN111925992B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 莊光磊;臧榮余;狄文
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州仁端生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 北京科家知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 宮建華

本發(fā)明提供了分泌抗Wnt?7a單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，雜交瘤細(xì)胞株為1B8A2和/或4G6F3。本發(fā)明還提供了上述的分泌抗Wnt?7a單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體，單克隆抗體的抗原表位處于Wnt?7a蛋白的C端或Wnt?7a蛋白的M段，處于Wnt?7a蛋白的C端的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；處于Wnt?7a蛋白的M段的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。本發(fā)明特異性強(qiáng)且靈敏度高，可通過配對檢測體液、組織中Wnt?7a蛋白含量，應(yīng)用于檢測Wnt?7a蛋白過量表達(dá)或診斷以Wnt?7a蛋白異常表達(dá)為表征的疾病的產(chǎn)品的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及Wnt-7a單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。

背景技術(shù)

Wnt蛋白家族由19個分泌糖蛋白組成，主要通過與 Frizzled(Fzd)受體結(jié)合參與細(xì)胞的增殖、分化及腫瘤生長等多種生物學(xué)過程。其中，Wnt-7a （即Wnt7a）屬于 Wnt 家族中的經(jīng)典 Wnt 信號分子,通過經(jīng)典的 Wnt / β-catenin 信號過程參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Wnt-7a的分子量為39kDa，含有349個氨基酸，在分泌之前剪切為含有318個氨基酸、分子量為48KD的成熟蛋白。在氨基酸水平上，人Wnt-7a蛋白和小鼠的Wnt-7a蛋白具有98%的相似性。Wnt-7a通常在肺、睪丸、淋巴結(jié)和腦中表達(dá)，通過Wnt/β-catenin信號通路參與調(diào)控細(xì)胞的生命活動。

Wnt信號通路對多種正常組織和癌組織的細(xì)胞增殖和分化起著重要的調(diào)控作用。Wnt信號分子是癌癥診斷、治療和預(yù)防以及再生醫(yī)學(xué)、組織工程的有效靶點。己公布的數(shù)據(jù)顯示W(wǎng)nt-7a在不同類型的惡性腫瘤中表現(xiàn)出不同的表達(dá)模式。在漿液性卵巢癌中，CTNNB 1未突變情況下，Wnt-7a通過CTNNB1(13-catenin)／TCF信號通路促進(jìn)卵巢癌進(jìn)展；在膀胱癌中，Wnt-7a的過表達(dá)促進(jìn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移，并且高表達(dá)Wnt-7a蛋白的膀胱癌患者的總生存期較短；在乳腺癌中，Wnt-7a作為一種關(guān)鍵的腫瘤細(xì)胞分泌因子，通過誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞活化而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者預(yù)后差。相反，在宮頸癌中，Wnt-7a可以抑制癌細(xì)胞的增殖和遷移。在小鼠中，Wnt-7a通過失活S期激酶相關(guān)蛋白(一種重要的細(xì)胞衰老的替代調(diào)節(jié)因子)誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，從而抑制肺癌的發(fā)生；在白血病中，Wnt-7a也被鑒定為腫瘤抑制基因。因此Wnt-7a對于卵巢癌的預(yù)示具有重要的意義，而市場上現(xiàn)有的檢測試劑盒，體系中多采用多克隆抗體，抗體特異性差，不能區(qū)分Wnt-7a高度同源家族蛋白，由于其抗體本身效價或特異性的原因，也使得其對Wnt-7a檢測的臨床效用受到局限，降低了樣本檢測的特異性，同時也對靈敏度產(chǎn)生一定的影響。因此急需獲得特異性識別Wnt-7a蛋白單克隆抗體，滿足臨床樣本檢測要求，提高檢測的靈敏度和特異性。

現(xiàn)有的檢測試劑盒體系中多采用多克隆抗體；抗體特異性差，不能區(qū)分Wnt-7a高度同源家族蛋白，由于其抗體本身效價或特異性的原因，也使得其對Wnt-7a檢測的臨床效用受到局限，降低了樣本檢測的特異性，同時也對靈敏度產(chǎn)生一定的影響。本發(fā)明通過雙抗體夾心的原理，利用高親和力高特異性配對單克隆抗體制備檢測試劑盒，采用全自動化學(xué)發(fā)光儀檢測樣品濃度。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述存在的問題，本發(fā)明的目的之一在于提供一種分泌抗Wnt-7a單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株；本發(fā)明的目的之二在于提供分泌抗Wnt-7a單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體；本發(fā)明的目的之三在于提供含有所述單克隆抗體的試劑盒；本發(fā)明的目的之四在于提供所述單克隆抗體在制備檢測Wnt-7a蛋白試劑中的應(yīng)用。本發(fā)明技術(shù)方案的其中一方面，提供了分泌抗Wnt-7a單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，雜交瘤細(xì)胞株為1B8A2和/或4G6F3，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，（保藏中心地址為：中國.武漢.武漢大學(xué)，電話：[phone]），1B8A2保藏編號為CCTCC NO:C202095, 4G6F3保藏編號為CCTCC NO:C202096。