[發明專利]一種百草枯半抗原、完全抗原、抗體、檢測試紙及試劑盒

有效

• 申請號: 202011012036.3
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN111925321B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 魏單平;趙榮茂;馮小宇;喬天奎
• 申請（專利權）人: 北京納百生物科技有限公司
• 主分類號: C07D213/74
• 分類號: C07D213/74;C12N5/20;C07K14/765;C07K16/44;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58
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本發明提供一種百草枯半抗原、完全抗原、抗體、檢測試紙及試劑盒，該百草枯半抗原，具有下式Ⅰ的結構式。該百草枯半抗原分子結構與百草枯原藥的相似度更高，使由該半抗原與蛋白偶聯得到的完全抗原產生的抗體具有更強的百草枯原藥親和力和特異性，進而使該試劑盒對百草枯的檢測靈敏度更高，可實現對生鮮乳，奶粉，雞肉及雞蛋中百草枯進行快速檢測。式Ⅰ。

技術領域

本發明屬于免疫學技術領域，具體涉及一種百草枯半抗原、完全抗原、抗體、檢測試紙及試劑盒。

背景技術

百草枯（Paraquat，又稱對草快、克蕪蹤，CAS號為1910-42-5），純品為白色結晶，是一種聯吡啶陽離子鹽有機雜環類速效除草劑，極易溶于水，具有廣譜性和觸殺性，植物接觸百草枯后，數小時后開始枯死。百草枯能被土壤膠體迅速、強烈吸附致鈍化而不影響植物根部。百草枯對人毒性極大，每年均有人因百草枯中毒身亡，其作用的主要靶器官是肺，主要表現在肺內出血和水腫，目前無特效解毒藥。百草枯已被20多個國家禁止或嚴格限制使用，我國自2014年7月1日起，撤銷百草枯水劑登記和生產許可、停止生產，2016年7月1日停止水劑在國內銷售和使用。《食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量》 GB2763-219規定了谷物、油料和油脂、蔬菜、水果、堅果、飲料類、哺乳動物肉類（海洋哺乳動物除外）、哺乳動物內臟（海洋哺乳動物除外）、禽肉類、禽類內臟、蛋類、生乳等食品中百草枯的最大殘留限量，因此，需要對食品中百草枯殘留量進行檢測。

現有國內外技術對百草枯的檢測主要有儀器分析法，例如液相色譜-質譜法、氣相色譜-質譜法、分光光度法和高效毛細管電泳法等，儀器分析方法操作繁瑣，靈敏度低，儀器價格昂貴，且不適合大量樣本檢測。免疫學分析法是以抗原與抗體之間的特異性識別和可逆性結合反應為基礎的痕量分析方法，免疫分析具有特異性強、靈敏度高、簡單、快速、適于大批量樣品檢測等優點。免疫學分析法包括酶聯免疫法、膠體金免疫檢測法、放射免疫分析法等，中國專利文獻CN102633876B公開了一種合成百草枯抗原的方法及其應用，采用該人工合成的百草枯抗原與使用該抗原制備得到的單克隆抗體，以酶聯免疫法檢測樣品中的百草枯，但酶聯免疫法具有免疫酶活力不穩定及實際應用中受操作條件影響的缺陷。此外，檢測中所使用的抗體對待測抗原的親和性強弱、特異性強弱直接影響免疫學分析法的檢測靈敏度，但該專利文獻中的抗原及抗體用于酶聯免疫法測定百草枯的靈敏度仍較低。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供一種百草枯半抗原、完全抗原、抗體、檢測試紙及試劑盒，該百草枯半抗原分子結構與百草枯原藥的相似度更高，使由該半抗原與蛋白偶聯得到的完全抗原產生的抗體具有更強的百草枯原藥親和力和特異性，進而使該試劑盒對百草枯的檢測靈敏度更高，可實現對生鮮乳，奶粉，雞肉及雞蛋中百草枯進行快速檢測。

為了解決上述問題，本發明提供一種百草枯半抗原，具有下式Ⅰ的結構式：

式Ⅰ。

半抗原設計的關鍵是確定半抗原分子結構中適當的修飾位點，以及在修飾位點用化學方法連接上具有一定碳鏈長度的且端基為活性基團的連接臂。本發明通過對百草枯半抗原分子結構進行適當的修飾，使其在分子結構、立體化學、電子分布等性質上與百草枯原藥的相似度更高，以便能夠將百草枯原有的分子特征結構暴露在完全抗原的表面，使完全抗原最大限度的被動物免疫活性細胞所識別，刺激機體產生特異性免疫應答，獲得的抗體具有更強的百草枯原藥親和力和特異性，進而使該試劑盒對百草枯的檢測靈敏度更高，可實現對生鮮乳，奶粉，雞肉及雞蛋中百草枯進行快速檢測。

本發明的另一目的是提供一種制備上述的百草枯半抗原的方法，包括：

S1. 將2-氯-4,4'-聯吡啶與碘甲烷溶于溶劑中，進行N-烷基化反應，得到式Ⅱ的化合物：

式Ⅱ；