[發明專利]水稻osa-miR5504基因在水稻矮化育種中的應用

有效

• 申請號: 202011009409.1
• 申請日: 2020-09-23
• 公開（公告）號: CN112226457B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 王鑫;王慧慧;歐陽解秀;廖鵬飛;朱友林;李紹波
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 袁紅梅

1.水稻osa-miR5504基因在水稻矮化育種中的應用，其特征在于，通過基因工程技術對水稻osa-miR5504基因進行敲除或抑制其表達，選育矮桿的水稻品種，所述水稻osa-miR5504基因的成熟序列如SEQ ID NO.1所示，其發夾結構序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據權利要求1所述的水稻osa-miR5504基因在水稻矮化育種中的應用，其特征在于，所述基因工程技術為CRISPR基因編輯技術。

3.根據權利要求2所述的水稻osa-miR5504基因在水稻矮化育種中的應用，其特征在于，通過CRISPR基因編輯技術抑制或敲除水稻osa-miR5504基因的表達，包括以下步驟：

(1)osa-miR5504的CRISPR/Cas9敲除表達載體構建：利用CRISPR/Cas9敲除靶點引物對、水稻內源U6a啟動子以及pYLCRISPR/Cas9質粒，經過限制性內切酶酶切、連接、轉化、菌落PCR檢測、sgRNA序列的測序分析，獲得osa-miR5504的CRISPR/Cas9敲除表達載體；

(2)osa-miR5504缺失表達矮稈水稻植株的獲得：將上述構建好的osa-miR5504的CRISPR/Cas9敲除表達載體，經農桿菌介導法，轉化粳稻日本晴，獲得轉基因水稻植株，在隨后的世代分離過程中，采用測序分析、qRT-PCR和Northern-blot雜交方法以鑒定獲得無T-DNA插入、無脫靶現象的osa-miR5504缺失表達轉基因純合水稻植株，并將其與野生型水稻同時種植于大田中，于抽穗晚期和成熟期進行株高和有效分蘗數的比較分析，以確定獲得了osa-miR5504缺失表達的矮稈水稻植株。