[發(fā)明專利]高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌及提高菌株多殺菌素產(chǎn)量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011009196.2
• 申請日: 2020-09-23
• 公開（公告）號(hào): CN112111439A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉天罡;劉然
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12P19/62;C12R1/01
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 胡甜甜

1.一類高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌，其特征在于：包括J1-019-A菌株、過表達(dá)spnJ的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌及過表達(dá)spnP的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌；所述J1-019-A菌株為在原多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌的基因組上敲除了與多殺合成不相關(guān)的聚酮合酶基因簇，并引入了可以后續(xù)進(jìn)行方便改造的attB位點(diǎn)，所述過表達(dá)spnJ的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌為在原多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌中過表達(dá)spnJ，所述過表達(dá)spnP的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌為在原多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌中過表達(dá)spnP。

2.如權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌，其特征在于：所述過表達(dá)spnJ的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌，采用強(qiáng)啟動(dòng)子ermEp或其他啟動(dòng)子過表達(dá)spnJ。

3.如權(quán)利要求1或2所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌，其特征在于：所述spnJ為多殺菌素生物合成途徑中的黃素依賴型氧化酶基因,其編碼蛋白催化反應(yīng)如下式I，

其中，R為-H或-CH₃。

4.如權(quán)利要求1或2所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌，其特征在于：所述過表達(dá)spnJ的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌采用強(qiáng)啟動(dòng)子ermEp過表達(dá)spnJ，其多殺菌素產(chǎn)量達(dá)到1934.97mg/L及以上。

5.如權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌，其特征在于：所述過表達(dá)spnP的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌，采用強(qiáng)啟動(dòng)子ermEp或其他啟動(dòng)子過表達(dá)spnP。

6.如權(quán)利要求1或5所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌,其特征在于：所述spnP為多殺菌素生物合成途徑中的福樂糖胺轉(zhuǎn)移酶基因,其編碼蛋白催化反應(yīng)如下式II，

其中，R為-H或-CH₃。

7.如權(quán)利要求1或5所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌，其特征在于：所述過表達(dá)spnP的多殺菌素生產(chǎn)菌株刺糖多孢菌采用強(qiáng)啟動(dòng)子ermEp過表達(dá)spnP，其多殺菌素產(chǎn)量達(dá)到2050.32mg/L及以上。

8.一種提高權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌的多殺菌素產(chǎn)量的方法，其特征在于：將權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌進(jìn)行不斷劃線傳代，挑選單菌落進(jìn)行發(fā)酵，從中選取產(chǎn)量高的菌株進(jìn)一步進(jìn)行傳代，進(jìn)而進(jìn)一步提升所述高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌的多殺菌素產(chǎn)量。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述高產(chǎn)多殺菌素的刺糖多孢菌通過權(quán)利要求8所述的方法，再經(jīng)發(fā)酵罐的放大發(fā)酵，能夠?qū)崿F(xiàn)多殺菌素的發(fā)酵生產(chǎn)。