[發(fā)明專利]一種阿膠及其制劑中驢源性成分的鑒定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011006220.7
• 申請(qǐng)日: 2020-09-23
• 公開（公告）號(hào): CN112782291A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石峰;鞏麗萍;咸瑞卿;張迅杰;杭寶建;宿書芳;謝強(qiáng)勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 陳娟

1.一種阿膠及其制劑中驢源性成分的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配置：準(zhǔn)確稱取驢源多肽A1、驢源多肽A2對(duì)照品各10 mg，分別置于10 mL容量瓶，用1%碳酸氫銨溶液溶解并定容至刻度，配制成濃度為1.0 mg/mL 的驢源多肽A1、驢源多肽A2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；準(zhǔn)確稱取驢源多肽A1、驢源多肽A2同位素內(nèi)標(biāo)各10 mg，分別置于10mL容量瓶，用1%碳酸氫銨溶液溶解并定容至刻度，配制成濃度為1.0 mg/mL 的驢源多肽A1同位素、驢源多肽A2同位素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-18℃保存；分別準(zhǔn)確吸取驢源多肽A1、驢源多肽A2標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各200 μL于10mL容量瓶，1%碳酸氫銨溶液稀釋至刻度，配制成濃度為20 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；分別準(zhǔn)確吸取驢源多肽A1同位素、驢源多肽A2同位素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各100 μL于10 mL容量瓶，1%碳酸氫銨溶液稀釋至刻度，配制成濃度為10 μg/mL混合內(nèi)標(biāo)工作溶液；

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：分別準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別加入混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，用1%碳酸氫銨溶液稀釋，配制成濃度為20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、500 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，內(nèi)標(biāo)濃度均為200 ng/mL，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定；

（3）試樣處理：稱取混勻后的試樣2.0 g，置于10 mL容量瓶中，加1%碳酸氫銨溶液溶解并稀釋至刻度，準(zhǔn)確吸取1.00 mL于15 mL離心管中，加胰蛋白酶溶液1.0 mL，再加入混合內(nèi)標(biāo)工作溶液100 μL，用1%碳酸氫銨溶液稀釋至5 mL，搖勻，置于恒溫箱中，于37℃恒溫酶解16小時(shí)，取出，冷卻至室溫，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，采用液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述驢源多肽A1氨基酸序列為GPAGPTGPVGK；所述驢源多肽A2氨基酸序列為GEAGAAGPAGPAGPR；所述驢源多肽A1同位素氨基酸序列為G(15N)PA(15N)GPTGPVGK；所述驢源多肽A2同位素氨基酸序列為G(15N)EA(15N)GAAGPAGPAGPR。

3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，所述液相色譜的條件為：C₁₈（100 mm×1 mm，5 μm），流速：0.3 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：2 μL；流動(dòng)相：A相：0.1%甲酸水，B相：0.1%甲酸乙腈，梯度洗脫。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述梯度洗脫為分段洗脫，第一段洗脫條件為：0-2min，95%A+5%B；2-5min，50%A+50%B；5-7min，30%A+70%B；7-10min，95%A+5%B；第二階段洗脫條件為：0-3min，80%A+20%B；3-5min，60%A+40%B；5-8min，55%A+45%B；8-10min，20%A+80%B。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的鑒定方法，其特征在于，所述質(zhì)譜的條件為：離子源：電噴霧（ESI）；掃描方式：正離子； 檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；毛細(xì)管電壓：3.5 kV；二級(jí)錐孔電壓：3.0 V；離子源溫度：140℃；脫溶劑氣溫度：350 ℃；脫溶劑氣流量：800L/h；錐孔反吹氣流量：50 L/h；定性離子對(duì)、定量離子對(duì)及碰撞能量如下所示：

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