[發(fā)明專利]褐環(huán)乳牛肝菌及其與植物聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011005096.2
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112222182A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔣麗娟;郁培義;周宵;申愛榮;黃忠良;張軒;李斯?jié)?/a>;吳子劍
• 申請（專利權(quán)）人: 中南林業(yè)科技大學(xué);湖南省林業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: B09C1/10
• 分類號: B09C1/10
• 代理公司: 長沙星耀專利事務(wù)所(普通合伙) 43205
• 代理人: 寧星耀

1.一種真菌褐環(huán)乳牛肝菌（Suillus luteus SL517），2019年11月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地點：中國武漢，保藏編號：CCTCC NO：2019982。

2.一種用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，用對重金屬耐受性強的外生菌根菌真菌所述褐環(huán)乳牛肝菌與本地鄉(xiāng)土植物樹種構(gòu)建菌根，種植于受重金屬污染的場地，去除和固定所述場地中的重金屬；所述樹種優(yōu)選馬尾松。

3.如權(quán)利要求2所述用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，所述褐環(huán)乳牛肝菌系結(jié)合污染土壤類型與植物生物學(xué)、生態(tài)學(xué)特點，從植物馬尾松林下根際土壤中存在的菌種中進(jìn)行分離初選，經(jīng)使用含不同濃度梯度重金屬離子溶液脅迫培育，篩選，獲得。

4.如權(quán)利要求3所述用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，所述褐環(huán)乳牛肝菌初選、篩選的具體方法包括以下步驟：

S1：從自然生長的馬尾松林分中，采取根際土，分離獲得初生褐環(huán)乳牛肝菌菌株；

S2：將步驟S1分離獲得的褐環(huán)乳牛肝菌菌株進(jìn)行純化擴繁；

S3：將步驟S2擴繁獲得的褐環(huán)乳牛肝菌菌種接種于含有不同濃度單一或多種復(fù)合重金屬的真菌培養(yǎng)基上，依據(jù)生長速度、重金屬富集量篩選出對重金屬耐受性強和富集能力強的褐環(huán)乳牛肝菌菌株SL517。

5.如權(quán)利要求2-4之一所述用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，包括以下具體步驟：

（1）將經(jīng)消毒和用含重金屬溶液浸泡預(yù)處理后的植物種子置于25℃-28℃培養(yǎng)箱中催芽，種子開始露白即胚根破殼時，播種到經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基質(zhì)中；

（2）將步驟（1）所述種子培育至長成幼苗后，截掉主根根尖，浸入于經(jīng)活化的所述褐環(huán)乳牛肝菌菌液中，然后移植到裝有培養(yǎng)基質(zhì)的穴盤中，所述培養(yǎng)基質(zhì)中含有重金屬礦土；優(yōu)選，截掉主根根尖，主根保留的長度為1-1.5cm；

（3）將步驟（2）所述幼苗培養(yǎng)至菌根化率高于80％的植株，植入擬修復(fù)的受重金屬污染的場地中。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述植物為根系發(fā)達(dá)的鄉(xiāng)土木本植物；所述植物優(yōu)選馬尾松。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述培養(yǎng)基質(zhì)為被低濃度重金屬離子溶液澆透過的蛭石混合基質(zhì)，所述滅菌得方法為110～130℃高壓滅菌90～150min；所述低濃度重金屬離子溶液的濃度為0.5-1.0 mmol·kg^-1。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，所述重金屬為Pb、Zn、Cd、Cr中的一種或幾種。

9.根據(jù)權(quán)利要求5-8之一所述用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述培養(yǎng)基質(zhì)為體積比1:(0.5～1.5)的無污染紅壤與受重金屬污染土壤的混合基質(zhì)。

10.根據(jù)權(quán)利要求5-9之一所述用木本植物與外生菌根菌聯(lián)合修復(fù)重金屬污染場地的方法，其特征在于，步驟（3）中，所述幼苗培養(yǎng)的條件為，溫度20～30℃的陽光溫室大棚，待到菌根化苗在陽光溫室大棚中生長到1-2m，將鏡檢有二杈小根和菌絲的幼苗移栽到擬修復(fù)的廢棄礦區(qū)重金屬污染土壤中；優(yōu)選，在移栽后的前5個月，當(dāng)干旱少雨時，對移栽幼苗進(jìn)行澆灌。