[發明專利]集RNA逆轉錄富集建庫多重PCR測序方法及建庫儀器

在審

• 申請號: 202011001877.4
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112064121A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 徐飛岳;管少華;緱靈山;黎億愛
• 申請（專利權）人: 深圳易倍科華生物科技有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C40B60/14;C12Q1/6869
• 代理公司: 深圳市創富知識產權代理有限公司 44367
• 代理人: 鐘文翰

1.一種集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，包括：

選擇基因組位點或RNA區域作為RNA模板并進行引物設計；所述引物設計用于獲得引物組；

對所述RNA模板進行逆轉錄及第一PCR擴增，得到第一產物；

對所述第一產物進行第一純化處理，得到第二產物；

對所述第二產物加入所述引物組進行第二PCR擴增，得到第三產物；

對所述第三產物進行第二純化處理，完成建庫富集。

2.根據權利要求1所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述引物組包括正向引物組和反向引物組。

3.根據權利要求2所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述引物組作為逆轉錄引物和PCR擴增引物。

4.根據權利要求1所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述引物設計是在Tag與gsp之間插入固定堿基或隨機堿基作為分子標簽以得到引物組。

5.根據權利要求1所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述對所述RNA模板進行逆轉錄及第一PCR擴增包括依次進行的逆轉錄階段、變性階段、擴增反應階段和儲存階段，其中，

逆轉錄階段，加入逆轉錄酶進行逆轉錄反應；

變性階段；

第一PCR擴增反應階段，加入所述引物組進行第一PCR擴增反應；

儲存階段，用于保持所述PCR擴增反應的產物。

6.根據權利要求5所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述逆轉錄階段反應時間為10分鐘-50分鐘；所述變性階段時間為30秒-5分鐘；所述擴增反應階段時間為15秒-1分鐘。

7.根據權利要求5所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述第一PCR擴增反應階段包括8-25個循環；所述第二PCR擴增反應階段包括5-25個循環。。

8.根據權利要求1所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述第一純化處理為按照0.8-1.5比例加入純化磁珠進行洗滌純化，之后加入適量去離子水溶解；所述第二純化處理為按照0.8-1.2比例加入純化磁珠進行洗滌純化，之后加入適量去離子水溶解。

9.根據權利要求1-8任一項所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法，其特征在于，所述集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法用于DNA/RNA共同建庫，通過設計相應的引物組進行總核酸擴增富集以及建庫。

10.一種建庫儀器，其特征在于，所述建庫儀器包括如權利要求1至9所述的集RNA逆轉錄與富集建庫的多重PCR測序方法。