[發明專利]一種單細胞分選過程中細胞樣品的處理方法

在審

• 申請號: 202011000900.8
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112080430A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 薛瑩;李航;顧珈瑜;田春悅;李備
• 申請（專利權）人: 長春長光辰英生物科學儀器有限公司
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N5/04;C12N5/07;C12R1/125
• 代理公司: 北京挺立專利事務所(普通合伙) 11265
• 代理人: 高福勇

本發明提供一種單細胞分選過程中細胞樣品的處理方法，包括按順序進行的如下步驟：步驟一：獲取所需細胞樣品；步驟二：將細胞樣品與用于保持細胞活性的保水物質共同平鋪于分選芯片表面；步驟三：將芯片置于分選平臺上進行目標細胞的分選；步驟四：將分選出的細胞置于接收裝置中的接收物質中；步驟五：對分選后的細胞進行后續檢測或培養操作。本發明使用具有保水功能的物質，可以在分選過程中使細胞保持原有的生物狀態和生物活性，不影響分選后對其活性的檢測以及擴大培養。

技術領域

本發明涉及細胞樣品處理方法，特別是一種單細胞分選過程中細胞樣品的處理方法。

背景技術

細胞是生命的基本單元，由于細胞具有表型異質性，在單細胞水平上對其進行研究對于解析生命活動的深層運作機制具有重要意義。

目前自然界中只有極少部分微生物能夠得到分離與培養，嚴重阻礙了對微生物生命活動規律的研究和微生物資源的開發。

為了推動微生物多樣性的研究，我們需要對微量難培養的微生物從復雜的樣品中進行分離和培養。然而，現有的環境微生物種類繁多，總數龐大，針對不同的微生物對能量、營養和理化條件的需求不同，現有的稀釋涂布平板法和平板劃線法，對于難培養的微生物很難分離獲得，且由于優勢菌群的生長抑制，在復雜的混合樣品中限制了很多微量菌群的生長。目前，我們應用細胞彈射技術和顯微切割技術，可以原位對微生物進行分離，無需使用常規培養基進行涂板和劃線通過生長繁殖篩選，無需培養即可得到單細胞。

基于細胞彈射技術和顯微切割技術的單細胞分選方法主要針對微生物進行分選及后續擴增和測序結合，其主要樣品為風干樣品，當生物樣品置于芯片上時活性較低或者已無生物活性。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明提供了一種單細胞分選過程中細胞樣品的處理方法，可以在單細胞分選過程中維持細胞樣品的細胞活性，有效提高了目標單細胞的分選效果。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種單細胞分選過程中細胞樣品的處理方法，包括按順序進行的如下步驟：

步驟一：獲取所需細胞樣品；

步驟二：將細胞樣品與用于保持細胞活性的水凝膠保水物質共同平鋪于分選芯片表面；

步驟三：將芯片置于分選平臺上進行目標細胞的分選；

步驟四：將分選出的細胞置于接收裝置中的接收物質中；

步驟五：對分選后的細胞進行后續檢測或培養操作。

作為進一步的優選實施方案，所述水凝膠保水物質為膠原溶液、聚乙二醇溶液、海藻酸鹽溶液的混合均勻后形成的凝膠溶液。

作為進一步的優選實施方案，所述膠原溶液的質量濃度為0.5％-10％；所述聚乙二醇溶液的體積濃度為0.1％-10％；所述海藻酸鹽溶液的體積濃度為0.1％-10％。

作為進一步的優選實施方案，所述凝膠溶液中膠原溶液、聚乙二醇溶液、海藻酸鹽溶液的體積比為1:1:1。

作為進一步的優選實施方案，步驟一中所述細胞樣品的種類為哺乳動物細胞、植物細胞或微生物細胞。

作為進一步的優選實施方案，步驟二的具體操作為：將水凝膠保水物質平鋪于分選芯片的表面形成厚度為1-100μm的保水薄層，然后將細胞樣品涂于所述保水薄層表面。

作為進一步的優選實施方案，步驟三中對目標細胞的分選方法為彈射分選或顯微切割。

作為進一步的優選實施方案，步驟四中所述接收裝置為培養皿或孔板。

作為進一步的優選實施方案，步驟四中所述接收物質為培養基、水、PBS、生理鹽水中的任一種。