[發明專利]一種用于肝癌治療的嵌合抗原受體及其應用

有效

• 申請號: 202011000749.8
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112079932B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 朱建高;楊文君
• 申請（專利權）人: 浙江康佰裕生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00;A61P1/16
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種用于肝癌治療的嵌合抗原受體及其應用。所述嵌合抗原受體依次包括先導肽、抗GPC3單鏈抗體、人CD8鉸鏈跨膜區、人4?1BB胞內區、人CD3ζ胞內區、自切割肽、信號肽、EGFRt蛋白、自切割肽和人IFN全長。本發明以GPC3作為抗原靶點設計開發新一代CAR?T細胞治療產品，并在GPC3?CAR的C末端增加基因優化的人全長干擾素(IFN)片段。與僅表達GPC3?CAR的CAR?T細胞相比，表達GPC3?CAR?IFN的CAR?T細胞具有更強的腫瘤殺傷能力，進一步提高了CAR?T細胞治療腫瘤的安全性和有效性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種用于肝癌治療的嵌合抗原受體及其應用，特別涉及一種包含GPC3-CAR并且分泌細胞因子的嵌合抗原受體及其應用。

背景技術

肝癌(HCC)是全世界范圍發病率和死亡率最高的幾種惡性腫瘤之一，發病率排名第五，而死亡率排名第三。目前肝癌的主要治療方式仍然以手術切除為主。而肝癌的術后復發率極高，5年生存率僅有10％左右。靶向治療藥物(如索拉非尼)也僅能延長患者平均生存期2到3個月。事實上，至今仍沒有更有效的肝癌治療手段。

腫瘤免疫治療由于其副作用小、治療效果明顯，正逐漸成為未來腫瘤治療的發展方向，被稱為繼手術、放療和化療之后的第四大腫瘤治療技術。其中，嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞治療由于在血液腫瘤中取得了顯著療效，正在成為一種富有前景的免疫治療策略。CAR-T細胞指的是一種經過人工基因改造的在細胞表面表達嵌合型抗原受體(CAR)的T細胞。CAR是CAR-T的核心部件，賦予T細胞以組織相容性抗原(HLA)非依賴的方式識別腫瘤表面腫瘤相關抗原(TAA)的能力。因此，CAR-T細胞在體內能特異性靶向表達有TAA表面標記的腫瘤細胞，并通過激活T細胞免疫反應殺傷腫瘤細胞。

CAR-T技術最早在1993年由以色列科學家Eshhar Zelig設計并報道，并在之后的二十多年中不斷優化和完善。在抗原存在情況下，T細胞需要按照一定順序依次接受三種信號才能完全激活，并且正常的增殖和分化。這三種信號分別是：第一信號，抗原結合的T細胞受體(TCR)和CD3胞內免疫受體酪氨酸激活基序(ITAM)轉導信號(CD3ζ)；第二信號，協同刺激信號，包括CD28、CD137、CD134等表面受體；第三信號，細胞因子，例如I型干擾素、白介素12(IL-12)等。CAR-T設計考慮到了T細胞激活的免疫學特性，CAR的結構包含胞外結合區，跨膜區和胞內信號區。通常胞外區包含能夠識別腫瘤相關抗原的scFv，跨膜區采用CD8、CD28等分子的跨膜區，胞內信號區采用免疫受體酪氨酸活化基序(ITAM)CD3ζ及共刺激信號分子CD28、CD137、CD134等的胞內信號區。目前市場主流的CAR設計為第二代CAR，即在CAR的胞內信號區提供T細胞激活所必須的第一信號(ITAM結構域)和第二信號(B7/CD28或4-1BB/CD137胞內結構域)，能夠引起T淋巴細胞的持續增殖，提高T細胞的細胞毒性、增殖活性等。

CAR的設計過程中，靶點的選擇尤為關鍵。作為CAR的靶點，必須同時滿足以下幾個條件：在腫瘤細胞中高表達；在正常組織中不表達或低表達；在腫瘤細胞表面表達。如果靶點選擇不當，可能造成CAR T淋巴細胞對表達相應抗原的正常組織的損傷，造成脫靶毒性。