[發明專利]一種非酒精性脂肪肝小鼠模型的構建方法

在審

• 申請號: 202011000333.6
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112088837A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 馬忠仁;陳侃;馬劍波;程燕;潘秋衛
• 申請（專利權）人: 西北民族大學;馬劍波
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;G01N21/84;G01N1/36;G01N1/30;G01N1/28
• 代理公司: 重慶樂泰知識產權代理事務所(普通合伙) 50221
• 代理人: 袁茹坤

本發明公開了一種非酒精性脂肪肝小鼠模型的構建方法，該方法采用高脂高糖飲食與晝夜節律紊亂協作誘導小鼠非酒精性脂肪肝模型建立。本發明的方法耗時短、造模成功率高、成本低且無因使用化學試劑而導致的毒副作用，稱為綠色動物模型。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種非酒精性脂肪肝小鼠模型的構建方法，具體涉及一種由高脂高糖飲食及節律紊亂誘導小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立方法。

背景技術

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指無酒精攝入病史，而以脂肪組織在肝臟內聚集(≥5％)為主要特征的病理表現。在一般人群中，目前非酒精性脂肪肝患病率為10％以上，而在發達國家，則超過30％，在肥胖人群中，非酒精性脂肪肝患病率高達75％。近十年，隨著人們生活條件的好轉和生活方式的改變，其患病率還在不斷上升。據研究報道，非酒精性脂肪肝的發病原因除了與肥胖、2型糖尿病、代謝綜合征、以及藥物所致的肝損傷等有關以外，也與高糖高脂飲食和作息紊亂等因素密切相關。由于非酒精性脂肪肝病情復雜，目前尚無好的治療方法，各醫療研究機構都在研發針對非酒精性脂肪肝的特效藥，因而，無論是新藥的安全性評估還是療效分析，都需要既經濟又可靠的動物模型。

目前，市場上尚無具有遺傳穩定性的非酒精性脂肪肝小鼠模型，一般的此類模型，都是后天誘導所得。不同的造模方法所需時間不同，通常的造模方法是用化學試劑配合高脂飲食，化學試劑造成肝臟損傷，隨后受損的肝臟細胞吸收高脂飼料中的脂肪滴。此類方法耗時長，且化學試劑造成的肝損傷容易導致小鼠猝死，不但使得造模成功率降低、造模成本提高，而且也不符合人體非酒精性脂肪肝的生理病理特征。

CN111084784A公開了一種非酒精性脂肪肝小鼠模型的建立方法，通過HFD(高脂)飼料誘導建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠模型，20周建成。

CN105850867A一種伴有肥胖、血脂異常和胰島素抵抗等特征的由高脂誘導的非酒精性脂肪肝病動物模型的建立方法。該發方法選用C57BL/6小鼠，隨機分模型組和對照組，適應性喂養后，模型組給予高脂飼料，對照組給予對照飼料，期間每周測量體重一次，10周后取血處死，檢測常規血脂及肝功能；取鮮活肝測定組織內膽固醇與甘油三酯含量；另取肝組織做進行H.E.和油紅O染色，判定NAFLD模型效果與質量。其中，模型組與對照組均采取正態分布分組方法，即以小鼠體重為依據，將小鼠劃分為高、中、低三個體重區間，將每個區間隨機分配到模型組和對照組中，模型組和對照組，每組8只，模型組喂食高脂飼料，對照組喂食對照飼料，在飼養方法上采取單只單籠飼養措施，飼料定量定投，早晚各一次，維持20g/籠，保證較小的組內差異，2-3天換墊料，給籠具消毒，墊料為刨花木屑，里面含有小木塊，要求高壓滅菌，造模10周，期間自由引水，水源為SPF級的滅菌水，每周稱量體重一次。各組取肝臟同一部位，分兩份，一份進行石蠟切片，并對其進行H.E.染色，另一份進行冰凍切片，并對其進行油紅O染色；進行分析，確定利用C57BL/6小鼠經高脂誘導成功建立了伴有肥胖、血脂異常、胰島素抵抗特征的非酒精性脂肪肝病動物模型。

CN103462948B一種新型非酒精性脂肪肝病模型制備方法，包括以下步驟：a.將飼養小鼠隨機分兩組，第一組：模型小組：第二組：對照小鼠；每天記錄狀態并取尿液、肝組織及血液作脂質分析；b.處理實驗對象；c.建立模型；d.肝組織與血液采集；e.將鼠肝組織標本進行常規冰凍切片，取材、普通膠水包冰凍切片、染色后封片；f.對模型小鼠常規進行病理檢查；g.對對照小鼠常規進行病理檢查；將f)和g)步驟中得出的動態分析肝組織脂肪進行對比，所述肉毒堿拮抗物，即THP；每天按照小鼠的實際體重，按重量為0.05％計算THP用量，以0.85％NaCl溶解，經腹腔注射一次/天，注射2～4周；小鼠暫養條件：所述兩組野生型小鼠均置于濕度55％，溫度為22±2℃，12小時晝/夜交替的恒溫環境飼養；所述對照小鼠以等量0.85％NaCl溶液，經腹腔注射。