[發明專利]一種用于生產β-欖香烯或吉馬烯A的重組菌株

有效

• 申請號: 202010995847.3
• 申請日: 2020-09-21
• 公開（公告）號: CN112063540B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 劉巍峰;張偉欣;孟祥鋒
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N9/88;C12N15/53;C12N15/54;C12P5/00;C12R1/865
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種重組菌，所述重組菌的出發菌株為釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），所述重組菌中表達有吉馬烯A合酶（GAS），所述GAS來源于多變魚腥藻（Anabaena variabilis）ATCC 29413，所述GAS的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.9所示。

2.根據權利要求1所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌還表達有如下任一或任意幾種目的基因：3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMGR1），法尼基焦磷酸合酶（ERG20）；所述HMGR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ERG20的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

3.根據權利要求1-2任一所述的重組菌，其特征在于，所述重組菌中還具有如下任一或任意幾種操作：

（1）下調鯊烯合酶（erg9）的表達；（2）失活或抑制二酰甘油焦磷酸磷酸酶1（dpp1）的表達；（3）失活或抑制脂質磷酸酶1（lpp1）的表達；（4）表達有外排通道蛋白pdr5和/或外排通道蛋白SNQ2；

所述erg9的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，所述dpp1的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，所述lpp1的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示，所述pdr5的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示，所述SNQ2的氨基酸序列如SEQ ID No.10所示。

4.一種制備重組菌的方法，所述方法包括在釀酒酵母中表達吉馬烯A合酶（GAS）的步驟，所述GAS來源于多變魚腥藻（Anabaena variabilis）ATCC 29413，所述GAS的氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.9所示。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法還包括在釀酒酵母中進行如下任一或任意幾種操作：

（1）表達3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（HMGR1）；

（2）表達法尼基焦磷酸合酶（ERG20）；

（3）下調鯊烯合酶（erg9）的表達；

（4）失活或抑制二酰甘油焦磷酸磷酸酶1（dpp1）；

（5）失活或抑制脂質磷酸酶1（lpp1）；

（6）表達外排通道蛋白pdr5和/或外排通道蛋白SNQ2；

所述HMGR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述ERG20的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，所述erg9的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，所述dpp1的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，所述lpp1的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示，所述pdr5的氨基酸序列如SEQ ID No.8所示，所述SNQ2的氨基酸序列如SEQ ID No.10所示。

6.權利要求1-3任一所述的重組菌或權利要求4-5任一方法制備得到的重組菌在生產β-欖香烯和/或吉馬烯A中的應用。

7.一種生產β-欖香烯和/或吉馬烯A的方法，所述方法包括對權利要求1-3任一所述的重組菌或權利要求4-5任一方法制備得到的重組菌進行發酵的步驟。

8.一種吉馬烯A合酶（GAS）的突變體，所述突變體的氨基酸序列如SEQ ID No.9所示。

9.包含權利要求8所述的突變體的載體或宿主細胞。

10.權利要求8所述的突變體，或者權利要求9所述的載體或宿主細胞在生產β-欖香烯和/或吉馬烯A中的應用。