[發(fā)明專利]誘導(dǎo)毀滅炭疽菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基、制備方法及誘導(dǎo)產(chǎn)孢的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010989575.6
• 申請日: 2020-09-19
• 公開（公告）號(hào): CN112175838B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚錦愛;黃鵬;余德億
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發(fā)明公開了一種誘導(dǎo)毀滅炭疽菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，1L培養(yǎng)基包括莜麥60?80g、葡萄糖20?30g、牛肉浸膏10?15g、瓊脂15?20g、紅心蓮多肉葉片80?100g和水1L；制備過程包括：稱取、過濾、混合、滅菌；誘導(dǎo)過程包括：菌株活化、菌絲體培養(yǎng)、分生孢子培養(yǎng)和分生孢子附著孢誘導(dǎo)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物病原真菌研究技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說是涉及一種誘導(dǎo)炭疽桿菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基及誘導(dǎo)產(chǎn)孢的方法。

背景技術(shù)

毀滅炭疽菌(Colletotrichum destructivum)寄主范圍十分廣泛，可侵染煙草、向日葵、印度豇豆、紫花苜蓿、多肉和紅掌等多種寄主植物，是國內(nèi)多肉種植過程中主要的葉片病害。毀滅炭疽菌主要以分生孢子盤、菌絲體或分生孢子形式在病殘組織或土壤中越冬，翌年初借氣流傳播到植株上。越冬后的菌絲體和分生孢子盤可發(fā)育成分生孢子成為初侵染源。此外，炭疽菌的流行與溫、濕度兩因素關(guān)系最為密切，通常以95％的高濕環(huán)境及24℃的溫度發(fā)病最為嚴(yán)重。

目前防治該病害主要以化學(xué)藥劑預(yù)防為主，科學(xué)合理的品種布局、減少初侵染源、抗性品種篩選等綜合技術(shù)措施為輔。而在病菌致病性測定、防治藥劑篩選及品種抗病性鑒定等試驗(yàn)中需要大量人工培養(yǎng)的分生孢子盤、分生孢子附著孢作為研究試驗(yàn)材料，快速獲得大量分生孢子盤、分生孢子附著孢對研究試驗(yàn)起到很大作用，也決定了試驗(yàn)的成敗與否。

現(xiàn)有技術(shù)常采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基進(jìn)行毀滅炭疽菌產(chǎn)孢培養(yǎng)，但其分生孢子盤、分生孢子附著孢生成量少，且獲得大量分生孢子所需時(shí)間為10-15d，無法在短時(shí)間內(nèi)滿足人工對毀滅炭疽菌研究的需要。

因此，如何提供一種誘導(dǎo)毀滅炭疽菌產(chǎn)附著孢及分生孢子盤的培養(yǎng)基及方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)毀滅炭疽菌產(chǎn)附著孢及分生孢子盤的培養(yǎng)基、制備方法和誘導(dǎo)方法，該培養(yǎng)基可提高毀滅炭疽菌的單位產(chǎn)孢量和附著孢形成率。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種誘導(dǎo)毀滅炭疽菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，1L培養(yǎng)基中包括下述質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：

作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，1L培養(yǎng)基中包括下述質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：

以上技術(shù)方案達(dá)到的技術(shù)效果是：本發(fā)明公開的培養(yǎng)基成分簡單，易取材，操作性強(qiáng)，以葡萄糖為碳源，牛肉浸膏為氮源，此外加入生長因子-莜麥，其中富含的維生素可促進(jìn)微生物代謝；加入多肉葉片對毀滅炭疽菌產(chǎn)孢能力具有一定的促進(jìn)作用。

一種誘導(dǎo)毀滅炭疽菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基的制備方法，包括下述步驟:

1)稱量：按照質(zhì)量稱取莜麥、葡萄糖、牛肉浸膏、瓊脂、紅心蓮多肉葉片和水，備用；

2)研磨、過濾：取多肉葉片，并用研磨成勻漿，過濾，取濾液；

3)將步驟2)所得濾液與步驟1)所得莜麥、葡萄糖、牛肉浸膏和瓊脂混合，加水溶解，得溶液；

4)將步驟3)所得溶液在115-125℃下滅菌20-30min，冷卻至45-55℃，每升培養(yǎng)基添加100μL濃度為50μg/mL的利福平，混合均勻，倒入培養(yǎng)皿中凝固，制得產(chǎn)孢培養(yǎng)基，備用。

以上技術(shù)方案達(dá)到的技術(shù)效果是：將各種組分混合后，滅菌，可去除組分中的微生物，防止在后期培養(yǎng)時(shí)，毀滅炭疽菌受到雜菌污染。

一種誘導(dǎo)毀滅炭疽菌產(chǎn)孢的方法，以上述制備得到的產(chǎn)孢培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)，包括下述步驟：

1)菌株活化：將分離得到的毀滅炭疽菌菌株接種到PDA培養(yǎng)基平板上，置于25-30℃恒溫培養(yǎng)箱中光照培養(yǎng)2-3d，得活化菌株；