[發明專利]解淀粉芽孢桿菌、菌劑、篩選方法及應用

有效

• 申請號: 202010985680.2
• 申請日: 2020-09-18
• 公開（公告）號: CN112239736B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 陳孝煊;許荔立;吳志新;謝夢琪;張詩雨
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/18;C12Q1/04;C12Q1/40;C12Q1/37;A23K50/80;A23K10/18;C12R1/07
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 丁倩

本發明涉及一株解淀粉芽孢桿菌菌株，命名為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)A23，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2020381。本發明還公開了該菌株制備的菌劑、篩選方法及應用。該菌株分離自克氏原螯蝦腸道，可以改善克氏原螯蝦腸道菌群，能顯著提高克氏原螯蝦對WSSV的抗病力。該菌株具有安全性，耐高溫，耐酸，便于貯存。該菌株具有廣譜抑菌性，對多種水產常見致病菌具有拮抗作用。

技術領域

本發明涉及菌株培育技術領域，尤其涉及解淀粉芽孢桿菌、菌劑、篩選方法及應用。

背景技術

對蝦白斑綜合征病毒(White spot syndrome virus，wssv)是引起對蝦白斑綜合征(White spot syndrome，WSS)的病原。在自然條件下，WSSV突破對蝦的第一道防線進入體內，往往處于潛伏狀態，此時病毒攜帶蝦的行為和體表特征均正常；在一定的環境因素協迫下，處于潛伏狀態的病

毒就會被“激活”，引起對蝦發生疾病，尤其對于克氏原螯蝦的養殖危害嚴重。對蝦養殖池是一個高密度放養的相對獨立的生態系統，生物種類有限，食物網復雜程度不高，自我凋節能力小，穩定性差；另外，許多生態環境應激因子(Stressor)可誘發病毒性病害的發生。

在生產實際中，可采用物理的、化學的和生物的方法改善和優化生態環境，構建有利于保持生態穩定的多種群生物群落，立體利用蝦池生態位，提高對蝦的健康水平和抵御疾病的能力。然而，現有的各種改善對蝦抵抗疾病的方法往往對對蝦的自身抵抗力提高作用有限，調節能力不佳。

發明內容

有鑒于此，本發明提供一株解淀粉芽孢桿菌，所述解淀粉芽孢桿菌菌株為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）A23，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: M 2020381。

本發明還提供一種所述的解淀粉芽孢桿菌的篩選方法，包括以下步驟：

S1、從克氏原螯蝦腸道中分離和純化得到芽孢桿菌；

S2、將S1得到的芽孢桿菌經過病原拮抗篩選，篩選出對指示菌有抑菌作用的菌株；

S3、將S2得到的菌株經過胞外產酶篩選，得到同時具有胞外產淀粉酶和蛋白酶的菌株，即為所述解淀粉芽孢桿菌A23。

具體的，所述指示菌包括嗜水氣單胞菌、鲇愛德華氏菌、溶藻弧菌、哈維氏弧菌和副溶血弧菌。

具體的，所述S2具體包括以下步驟：

S21、將指示菌菌液吸取加入至未凝固的BHI培養基中，混勻，倒入平板凝固；

S22、挑取所述S1步驟篩選的菌株活化24h點種于平板上，28℃培養24 h，選取抑菌圈最大的菌落作進一步篩選用。

具體的，所述S3具體包括以下步驟：

S31、將S2得到的菌株，接種于產蛋白酶培養基上，37°C下培養后，挑選出能產生水解圈的單菌落，測量水解圈直徑與菌落直徑，選取水解圈直徑與菌落直徑差值最大的菌株做進一步篩選用；

S32、將S31得到的菌株接種于產淀粉酶培養基上，37°C下培養后。挑選出能產生水解圈的單菌落，染色并測量水解圈直徑與菌落直徑，選取水解圈直徑與菌落直徑差值最大的菌株即為所述解淀粉芽孢桿菌A23。

本發明還提供一種解淀粉芽孢桿菌菌劑，由所述的解淀粉芽孢桿菌菌株經活化、發酵培養制備得到。

本發明還提供所述的解淀粉芽孢桿菌及其菌劑在克氏原螯蝦養殖上的應用。

本發明至少具有以下有益效果：