[發明專利]一種新型冠狀病毒熒光qRT-PCR法快速檢測體系

有效

• 申請號: 202010981591.0
• 申請日: 2020-09-17
• 公開（公告）號: CN112159868B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 李丹;董晉濤;秦資;李芳敏;祝君;巫益鳴;陳才夫;熊磊
• 申請（專利權）人: 上海思路迪醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京市蘭臺律師事務所 11354
• 代理人: 張峰

1.引物探針組合物，其特征在于，包括選自如下的引物探針組：

用于檢測新型冠狀病毒ORF1ab基因的引物探針組A，所述引物探針組A包括SEQ IDNO.1所示的正向引物，SEQ ID NO.2所示的反向引物，SEQ ID NO.3所示的探針；

用于檢測新型冠狀病毒N基因的引物探針組B，所述引物探針組B包括SEQ ID NO.4所示的正向引物，SEQ ID NO.5所示的反向引物，SEQ ID NO.6所示的探針；

用于檢測內標的引物探針組C，所述引物探針組C包括SEQ ID NO.7所示的正向引物，SEQ ID NO.8所示的反向引物，SEQ ID NO.9所示的探針。

2.一種用于新型冠狀病毒檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如權利要求1所述的引物探針組合物。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述引物探針組A和B的引物在RT-PCR反應體系中的終濃度均為0.8μM，所述引物探針組A和B的探針在RT-PCR反應體系中的終濃度均為0.4μM，所述引物探針組C的引物在RT-PCR反應體系中的終濃度為0.4μM，所述引物探針組C的探針在RT-PCR反應體系中的終濃度為0.2μM。

4.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括Tris緩沖液、鎂離子、dA/G/C/UTPs、DNA聚合酶、逆轉錄酶、Anti-Taq、BSA、UNG酶、RNasin。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述逆轉錄酶終濃度為0.4U/μL，所述鎂離子終濃度為10mM。

6.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述引物探針組A和B的引物終濃度均為0.8μM、所述引物探針組A和B的探針終濃度均為0.4μM、所述引物探針組C的引物終濃度均為0.4μM、所述引物探針組C的探針終濃度均為0.2μM、所述鎂離子終濃度為10mM、所述dATP終濃度為0.4mM、所述dCTP終濃度為0.4mM、所述dGTP終濃度為0.4mM、所述dUTP終濃度為0.8mM、所述DNA聚合酶終濃度為0.2U/μL、所述逆轉錄酶終濃度為0.4U/μL、所述Anti-Taq終濃度為0.2U/μL、所述BSA終濃度為0.26％、所述UNG酶終濃度為0.004U/μL、所述RNasin終濃度為0.32U/μL。

7.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品。

8.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述新型冠狀病毒的樣本來源于人鼻咽拭子、痰液樣本、肺泡灌洗液樣本、血液樣本、糞便樣本或環境樣本。

9.如權利要求1所述的引物探針組合物在制備通過如下方法檢測新型冠狀病毒的試劑盒的應用，其特征在于，所述方法包括：

樣本采集、新型冠狀病毒核酸提取、核酸擴增、結果判定；

所述結果判定包括在核酸擴增步驟得到的擴增曲線上的指數擴增階段設定閾值，得到對應的Ct值，根據Ct值判定新型冠狀病毒核酸檢測結果；

其中對于新型冠狀病毒核酸檢測結果的判定是同一核酸擴增反應體系中針對新型冠狀病毒兩個靶基因的核酸擴增得到的兩個Ct值綜合判定。

10.一種用于新型冠狀病毒檢測的RT-PCR反應體系，其特征在于，所述反應體系包括權利要求1所述的引物探針組合物，且還包括Tris緩沖液、鎂離子、dA/G/C/UTPs、DNA聚合酶、逆轉錄酶、Anti-Taq、BSA、UNG酶、RNasin。