[發明專利]一種廣藿香醇生產酵母菌株及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 202010978248.0
• 申請日: 2020-09-17
• 公開（公告）號: CN112175848A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 劉敏;王風清;魏東芝;林陽琛
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12N15/90;C12N15/62;C12N15/53;C12N15/31;C12P7/02;C12R1/865
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 余永莉

1.一種廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，以釀酒酵母菌株為出發菌，在所述出發菌中多拷貝整合ERG20和PTs的融合酶FPTs，即可獲得一種廣藿香醇生產酵母菌株，其中，所述融合酶FPTs的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根據權利要求1所述的廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，還包括在所述出發菌中進行基因ROX1、YJL064w或YPL062w的單獨敲除或這三種基因的任意組合敲除，所述基因ROX1的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述基因YJL064w的核苷酸序列如SEQ IDNO:8所示，所述基因YPL062w的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。

3.根據權利要求2所述的廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，還包括在所述出發菌中過表達基因ERG11和CTT1，所述基因ERG11的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述基因CTT1的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

4.根據權利要求1所述的廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，所述出發菌是釀酒酵母菌株BY4741，或以釀酒酵母菌株BY4741為出發菌經過基因改造后能合成豐富FPP前體的酵母菌株。

5.根據權利要求4所述的廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，所述出發菌是以釀酒酵母菌BY4741為出發菌株改造的釀酒酵母菌株REL003，所述改造包括過表達UPC2-1，tHMG，以及以HXT1啟動子替換菌株本身ERG9啟動子。

6.根據權利要求1所述的廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，在所述出發菌中融合酶FPTs的多拷貝整合包括1拷貝～7拷貝，最優選為7拷貝。

7.根據權利要求1所述的廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，所述融合酶FPTs中的PTs為植物廣藿香來源，ERG20為前體FPP合酶，如SEQ ID NO:1所示的所述融合酶FPTs的核苷酸序列為密碼子優化后的序列。

8.根據權利要求3所述的廣藿香醇生產酵母菌株的構建方法，其特征在于，所述基因ROX1，YJL064w，YPL062w，ERG11和CTT1均為酵母本身來源。

9.一種根據權利要求1～8中任意一項所述的構建方法構建的廣藿香醇生產酵母菌株。

10.一種根據權利要求9所述的廣藿香醇生產酵母菌株在廣藿香醇生產中的應用，其特征在于，將所述廣藿香醇生產酵母菌株在發酵罐中進行發酵，即可高產量制備廣藿香醇。