[發明專利]一種用于測定藍細菌毒素的試劑盒

在審

• 申請號: 202010977457.3
• 申請日: 2020-09-17
• 公開（公告）號: CN112396158A
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 于紅衛;孫楓林;鞠光秀;宋旭巖;楊超
• 申請（專利權）人: 青島市疾病預防控制中心（青島市預防醫學研究院）
• 主分類號: G06N3/04
• 分類號: G06N3/04;G06N3/08;G06T3/40;G06T7/155;G01N27/62
• 代理公司: 青島鼎尖知識產權代理有限公司 37318
• 代理人: 宋濤

本發明屬于測定藍細菌毒素的試劑盒技術領域，公開了一種用于測定藍細菌毒素的試劑盒，所述用于測定藍細菌毒素的試劑盒包括：弱陽離子交換樹脂、弱陰離子交換樹脂、聚合物二乙烯基苯?N?乙烯吡咯烷酮共聚物。本發明通過圖像增強程序對采集質譜圖像進行增強處理方法大大提高質譜圖分辨率，提高清晰度；同時，通過對分離的藍細菌進行密封凍存處理方法為避免細胞受冷凍損傷，在進行細菌凍存時需要加入冷凍保護劑，冷凍保護劑不僅能夠同細菌懸液中的水分子結合，發生水合作用，弱化水的結晶過程使溶液的粘性增加，從而減少冰晶的形成，而且冷凍保護劑還可以通過在細胞內外維持一定的摩爾濃度，降低細胞內外未結冰溶液中電解質的濃度，使細胞免受溶質的損傷。

技術領域

本發明屬于測定藍細菌毒素的試劑盒技術領域，尤其涉及一種用于測定藍細菌毒素的試劑盒。

背景技術

藍細菌的細胞一般比細菌大，通常直徑為3～10μm，最大的可達60μm，如巨顫藍細菌。根據細胞形態差異，藍細菌可分為單細胞和絲狀體兩大類。單細胞類群多呈球狀、橢圓狀和桿狀，單生或團聚體，如粘桿藍細菌和皮果藍細菌等屬；絲狀體藍細菌是有許多細胞排列而成的群體，包括：有異形胞的(如魚腥藍細菌屬)，無異形胞的(如顫藍細菌屬)，有分支的(如費氏藍細菌屬)。

藍細菌的細胞構造與革蘭氏陰性細菌相似。細胞壁有內外兩層，外層為脂多糖層，內層為肽聚層。許多種能不斷地向細胞壁外分泌膠粘物質，將一群細胞或絲狀體結合在一起，形成粘質糖被或鞘。細胞膜單層，很少有間體。大多數藍細菌無鞭毛，但可以“滑行”。藍細菌光合作用的部位稱為光合片層，數量很多，以平行或卷曲方式貼近地分布在細胞膜附近，其中含有葉綠素和藻膽素(一類輔助光合色素)。藍細菌的細胞內含有糖原、聚磷酸鹽、以及藍細菌肽等貯藏物以及能固定的羧酶體，少數水生性種類中還有氣泡。在化學組成上，藍細菌最獨特之處就是含有兩個或多個雙鍵組成的不飽和脂肪酸，而細菌通常只含有飽和脂肪酸和一個雙鍵的不飽和脂肪酸。藍細菌的細胞有幾種特化形式，較重要的是異形胞、靜息孢子、鏈絲段和內孢子。異形胞是存在于絲狀體藍細菌中的較營養細胞稍大、色淺、壁厚、位于細胞鏈中間或末端、且數目少而不定的特化細胞。異形胞是固氮藍細菌的固氮部位。營養細胞的光合產物與異形胞的固氮產物，可通過胞間連絲進行物質交換。靜息孢子是一種著生于絲狀體細胞鏈中間或末端的形大、色深、壁厚的休眠細胞，胞內有貯藏性物質，具有抗干旱或冷凍的能力。鏈絲段又稱連鎖體或藻殖段，是長細胞斷裂而成的短鏈段，具有繁殖功能。內孢子是少數藍細菌種類在細胞內形成許多球形或三角形的內孢子，成熟后可釋放，具有繁殖功能。然而，現有用于測定藍細菌毒素的試劑盒獲取的質譜圖不清晰，分辨率低，影響對藍細菌毒素的測定；同時，對藍細菌保存容易造成細胞損傷。

綜上所述，現有技術存在的問題是：現有用于測定藍細菌毒素的試劑盒獲取的質譜圖不清晰，分辨率低，影響對藍細菌毒素的測定；同時，對藍細菌保存容易造成細胞損傷。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一種用于測定藍細菌毒素的試劑盒。

本發明是這樣實現的，一種用于測定藍細菌毒素的試劑盒包括：

弱陽離子交換樹脂、弱陰離子交換樹脂、聚合物二乙烯基苯-N-乙烯吡咯烷酮共聚物。

一種用于測定藍細菌毒素的試劑盒測定方法包括以下步驟：

步驟一，通過質譜儀采集藍細菌質譜圖像；通過圖像增強程序對采集質譜圖像進行增強處理；

步驟二，通過包含弱陽離子交換樹脂、弱陰離子交換樹脂、聚合物二乙烯基苯-N-乙烯吡咯烷酮共聚物的固相提取設備上制備潛在包括環肽和生物堿藍細菌毒素的水樣品，以形成保留或濃縮的毒素樣品，使所述保留或濃縮的毒素樣品在流動相中洗脫或重構，以形成樣品提取物；

步驟三，將潛在包括環肽或生物堿藍細菌毒素的樣品提取物置于質譜儀中以形成質譜，根據質譜來測定藍細菌毒素；通過分離設備將提取物中的藍細菌進行分離；