[發(fā)明專利]一種石斑魚(yú)精巢人工催熟的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010977029.0
• 申請(qǐng)日: 2020-09-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112011569A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-12-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王慶;趙會(huì)宏;鄭樂(lè)云;吳水清
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/66;C12N15/12;A01K67/027
• 代理公司: 廣州市時(shí)代知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44438
• 代理人: 陳旭燕

本發(fā)明公開(kāi)了一種石斑魚(yú)精巢人工催熟的方法，其包括以下步驟：構(gòu)建Dmrt1基因真核表達(dá)載體；采用脂質(zhì)體包埋構(gòu)建好的Dmrt1真核表達(dá)載體；在繁殖季節(jié)選擇不能產(chǎn)生精液的雄性石斑魚(yú)；在石斑魚(yú)腹部開(kāi)微孔，采用微量注射器將脂質(zhì)體包埋的Dmrt1真核表達(dá)載體直接注射入精巢；注射完放入水泥池飼養(yǎng)，按時(shí)投喂高蛋白餌料。本發(fā)明構(gòu)建了Dmrt1真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中培養(yǎng)，可獲得大量帶dmrt1基因的重組表達(dá)載體；再通過(guò)脂質(zhì)體包埋載體后注射到石斑魚(yú)精巢中，直接促進(jìn)精巢的成熟，具有準(zhǔn)確性高，催熟效率高，適用范圍廣的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及石斑魚(yú)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種石斑魚(yú)精巢人工催熟的方法。

背景技術(shù)

石斑魚(yú)隸屬于硬骨魚(yú)綱(Osteichthyes)、輻鰭亞綱(Neopterygii)、棘鰭總目(Acanthopterygii)、鱸形目(Perciformes)、鱸亞目(Percoidei)、鮨科(Serranidae)。由于石斑魚(yú)具有富含營(yíng)養(yǎng)、肉質(zhì)鮮美、低脂肪、高蛋白等特點(diǎn)，是人們喜愛(ài)的海水魚(yú)珍品。石斑魚(yú)的價(jià)格昂貴，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，近年來(lái)由于近岸濫捕，產(chǎn)量銳減，市場(chǎng)供不應(yīng)求。在我國(guó)南方沿海廣東、海南、福建、廣西等地石斑魚(yú)已成為海水養(yǎng)殖的主要對(duì)象，經(jīng)濟(jì)價(jià)值巨大。

石斑魚(yú)為典型的雌雄同體雌性先熟魚(yú)類，低齡魚(yú)卵巢先成熟，表現(xiàn)為雌性。隨著年齡的增長(zhǎng)，卵巢萎縮吸收，性逆轉(zhuǎn)為雄魚(yú)。因此，在人工繁育中往往存在雄魚(yú)缺乏或雌雄親魚(yú)成熟不同步的現(xiàn)象，此外，很多雄性親魚(yú)在繁殖季節(jié)精巢很難發(fā)育成熟產(chǎn)生精子，并且近年來(lái)雄魚(yú)產(chǎn)出的精子數(shù)量和質(zhì)量下降明顯，由于這個(gè)原因?qū)е率唪~(yú)雄性親魚(yú)培育難度加大，這嚴(yán)重制約了石斑魚(yú)人工繁育工作的開(kāi)展。

目前，針對(duì)雄性石斑魚(yú)的催熟方法基本沒(méi)有，主要通過(guò)加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)來(lái)促進(jìn)其精巢的成熟，但是此方法往往效果不佳。通過(guò)加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)來(lái)提高其精巢成熟往往操作時(shí)間長(zhǎng)，而且培養(yǎng)的準(zhǔn)確性低，大部分加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)后還是不能產(chǎn)出高質(zhì)量精子，同時(shí)飼喂方法，生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)其影響比較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中通過(guò)加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)來(lái)提高雄性石斑魚(yú)的精巢成熟所存在的操作時(shí)間長(zhǎng)、培養(yǎng)的準(zhǔn)確性低的問(wèn)題，提供一種石斑魚(yú)精巢人工催熟方法，該方法具有準(zhǔn)確性高、快速的優(yōu)點(diǎn)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種石斑魚(yú)精巢人工催熟的方法，其特征在于，包括以下步驟：

構(gòu)建Dmrt1基因真核表達(dá)載體：通過(guò)克隆獲得斜帶石斑魚(yú)Dmrt1開(kāi)放讀碼框，通過(guò)雙酶切和連接將基因構(gòu)入真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中擴(kuò)大培養(yǎng)，提取獲得大量帶dmrt1基因的真核表達(dá)載體；

脂質(zhì)體包埋真核表達(dá)載體：采用脂質(zhì)體包埋構(gòu)建好的Dmrt1真核表達(dá)載體；

選擇石斑魚(yú)：在繁殖季節(jié)選擇不能產(chǎn)生精液的雄性石斑魚(yú)；

注射脂質(zhì)體包埋的Dmrt1真核表達(dá)載體：在石斑魚(yú)腹部開(kāi)微孔，采用微量注射器將脂質(zhì)體包埋的Dmrt1真核表達(dá)載體直接注射入精巢；

注射完成后的飼養(yǎng)：注射完放入水泥池飼養(yǎng)，按時(shí)投喂高蛋白餌料。

Dmrt1(Doublesex and mab-3related transcription factor 1)是雄性性別分化和性別決定的關(guān)鍵基因，對(duì)脊椎動(dòng)物精巢發(fā)育至關(guān)重要。在哺乳類、鳥(niǎo)類、爬行類、魚(yú)類和兩棲類等動(dòng)物中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了該基因。在小鼠的胚胎中，Dmrt1在雌雄生殖期的早期都有表達(dá)，隨后睪丸中表達(dá)量增加，而卵巢中表達(dá)量減弱。通過(guò)RT-PCR可以在鱷魚(yú)胚胎泌尿系統(tǒng)的早期檢測(cè)Dmrt1的表達(dá)。隨著性腺的發(fā)育，雄性的表達(dá)量明顯較雌性的高。在魚(yú)類，Dmrt1主要在精巢的支持細(xì)胞(Sertoli cells)表達(dá)，對(duì)精巢的分化、雄性性狀的維持和精巢的成熟起關(guān)鍵作用。