[發明專利]一種骨髓培養基及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010976259.5
• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112080466B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 李曉輝;王亦平
• 申請（專利權）人: 上海培暉生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 廣州幫專高智知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44674
• 代理人: 顏德昊

本發明提出了一種骨髓培養基及其制備方法和應用。所述骨髓培養基包括基礎培養基，以及加入基礎培養基中的胎牛血清、L?抗壞血酸、維生素E、青霉素、鏈霉素、丙酮酸鈉、亞硒酸鈉、rhu?EPO培養的人類淋巴細胞培養上清、NaHCO₃。本發明采用rhu?EPO培養的人類淋巴細胞培養上清提供骨髓生長需要的生長因子，且人類淋巴細胞培養上清使用量低，易獲得滿足生產所需要的人類淋巴瘤細胞培養上清且成本也低，便于批量生產。并且，本發明提供的骨髓培養基培養出的骨髓細胞用于染色體核型分析分裂相多且清晰，形態好而且分散度良好。

技術領域

本發明涉及細胞培養領域，尤其涉及一種骨髓培養基及其制備方法和應用。

背景技術

染色體畸變與血液系統疾病具有緊密的相關性。近年來，隨著細胞培養和染色體顯帶等技術的發展，細胞遺傳學成為血液系統疾病分析、研究中不可缺少的重要內容。骨髓染色體核型分析用于血液系統疾病的診斷、治療、預后、發病機制研究具有非常重要的作用。然而，骨髓染色體核型制備過程復雜，影響因素多，成功率低且成本高，獲得的分裂相少，染色體粗短，而且分散不好。

近年來，已有一些骨髓培養基；例如程建兵、夏成青、陳紅梅等采用RPMI1640基礎培養基、青霉素/鏈霉素、胎牛血清和人類淋巴瘤細胞培養物配置骨髓培養基；谷超采用基礎培養基、青霉素、鏈霉素、胎牛血清、人類淋巴瘤細胞培養物和化合物Cephaloziellin?N配置骨髓培養基；上述兩種骨髓培養基培養出的骨髓細胞用于染色體G制片，均去取得良好的效果。但是，上述兩種骨髓培養基含有人類淋巴瘤細胞培養物的濃度為60-140ul/ml，濃度較高，用于批量生產，難以獲得滿足生產所需要的人類淋巴瘤細胞培養物，并且成本也高。

因此，建立一種骨髓細胞生長良好，分裂相多且清晰，形態好而且分散度良好，成本較低，便于批量生產的骨髓細胞培養基尤為重要。

發明內容

本發明為了克服現有技術的不足，提供一種骨髓培養基，使培養出的骨髓細胞用于G顯帶染色體核型分析時，背景清晰，染色體分裂相多，形態好且分散度好，易于觀察；并且成本低，便于批量生產。

除此之外，本發明還分別提出了上述骨髓細胞培養基的制備方法和應用。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案予以實現：

一種骨髓培養基，所述骨髓培養基包括基礎培養基，以及加入基礎培養基中的胎牛血清、L-抗壞血酸、維生素E、青霉素、鏈霉素、丙酮酸鈉、亞硒酸鈉、rhu-EPO培養的人類淋巴細胞培養上清、NaHCO₃。

優選的，所述的基礎培養基為RPMI1640培養基。

所述骨髓培養基的各組分的濃度為：

胎牛血清在基礎培養基中的濃度為80-150mL/L；

L-抗壞血酸在基礎培養基中的濃度為5-20mg/L；

維生素E在基礎培養基中的濃度為5-15mg/L；

青霉素在基礎培養基中的濃度為1×10⁵U/L；

鏈霉素在基礎培養基中的濃度為50mg/L；

丙酮酸鈉的濃度為80-120mg/L；

亞硒酸鈉在基礎培養基中的濃度為10-20nM；

rhu-EPO培養的人類淋巴細胞培養上清在基礎培養基中的濃度為0.5-5mL/L；

NaHCO₃在基礎培養基中的濃度為1.5-2g/L。