[發(fā)明專利]基于壓電適配體傳感器和AuNPs無標(biāo)簽檢測OA的裝置及方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010976217.1 | 申請日： | 2020-09-16 |
| 公開（公告）號： | CN112195098A | 公開（公告）日： | 2021-01-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳春生;田玉蘭;朱平;陳雅婷;杜立萍 | 申請（專利權(quán)）人： | 西安交通大學(xué) |
| 主分類號： | C12M1/34 | 分類號： | C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/682;C12Q1/6825;G01N29/02 |
| 代理公司： | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200 | 代理人： | 馬貴香 |
| 地址： | 710049 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 壓電 適配體 傳感器 aunps 標(biāo)簽 檢測 oa 裝置 方法 | ||
1.基于壓電適配體傳感器和AuNPs無標(biāo)簽檢測OA的裝置，其特征在于，包括QCM檢測儀器(1)、QCM檢測芯片(2)、檢測腔(3)、進(jìn)樣管(4)、出樣管(5)、蠕動泵(6)、數(shù)據(jù)采集線(7)和電腦(8)；
所述QCM檢測芯片(2)置于QCM檢測儀器(1)內(nèi)，所述檢測腔(3)覆蓋在QCM檢測芯片(2)上并固定于QCM檢測儀器(1)上，所述進(jìn)樣管(4)和檢測腔(3)的進(jìn)樣孔相連，出樣管(5)一端和檢測腔(3)的出樣孔相連，另一端和蠕動泵(6)相連，數(shù)據(jù)采集線(7)與QCM檢測儀器(1)和電腦(8)相連接對信號進(jìn)行采集。
2.基于壓電適配體傳感器和AuNPs無標(biāo)簽檢測OA的方法，采用權(quán)利要求1所述的基于壓電適配體傳感器和AuNPs無標(biāo)簽檢測OA的裝置，其特征在于，包括以下步驟：
(1)AuNPs的制備：采用檸檬三酸鈉氯金酸方法合成直徑為12-14nm的AuNPs；
(2)采用AuNPs修飾探針鏈DNA，得到DNA-AuNPs溶液；
(3)采用固定鏈修飾QCM傳感器芯片并封閉活性位點；
(4)將步驟(3)處理后的QCM傳感器芯片置于QCM檢測儀器中，將不同濃度的OA溶液與適配體溶液混合孵育后，將混合溶液注入檢測腔內(nèi)，然后通入DNA-AuNPs溶液，比較通入DNA-AuNPs前后頻率響應(yīng)的變化，計算頻率變化值△F，擬合出頻率變化值△F關(guān)于OA濃度的標(biāo)定曲線；
(5)對待測OA樣品溶液進(jìn)行檢測，得到該待測OA樣品溶液的頻率變化值△F，帶入步驟(4)所得標(biāo)定曲線，即能夠計算出待測OA樣品溶液中OA的濃度。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于壓電適配體傳感器和AuNPs無標(biāo)簽檢測OA的方法，其特征在于，步驟(1)具體包括以下步驟：
(1.1)將氯金酸粉末溶于去離子水中，配制50mM的氯金酸儲液，于4℃避光保存；
(1.2)向超純水加入氯金酸儲液，所述超純水和氯金酸儲液的體積比為1:49，油浴中攪拌加熱至沸騰回流；
(1.3)迅速加入38.8mM的檸檬酸三鈉溶液，所述檸檬酸三鈉溶液與超純水的體積比為5:49，繼續(xù)煮沸15min后，停止加熱后攪拌冷卻至室溫，得到納米金溶液，4℃避光保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于壓電適配體傳感器和AuNPs無標(biāo)簽檢測OA的方法，其特征在于，步驟(2)具體包括以下步驟：
(2.1)玻璃容器清潔：玻璃容器用12M氫氧化鈉溶液浸泡1h后，用去離子水沖洗，烘干備用；
(2.2)將1mM的巰基化的探針鏈溶液5'-SH-(CH)6-CCACA CATCC GCATG ACGTC ACATTGAC-3'與500mM醋酸鈉溶液和10mM TCEP溶液混合，室溫下孵育1h，然后將混合溶液加入(2.1)處理過的玻璃容器中，再加入步驟(1.3)制備的納米金溶液，輕輕搖勻，室溫下避光孵育16h；
其中，巰基化的探針鏈溶液5'-SH-(CH)6-CCACA CATCC GCATG ACGTC ACATT GAC-3'、醋酸鈉溶液和TCEP溶液的體積比為9:1:1.5；所述醋酸鈉溶液與納米金溶液的體積比為1:3000；所述醋酸鈉溶液pH為5.2；
(2.3)孵育后，再加入500mM Tris acetate緩沖液，輕輕混勻，再逐滴加入1M的氯化鈉溶液，輕輕搖勻后室溫下避光放置一天，得到反應(yīng)液；
其中，所述醋酸鈉溶液、Tris acetate緩沖液和氯化鈉溶液的體積比為1:30:300；所述Tris acetate緩沖液pH為8.2；
(2.4)上述反應(yīng)液16 110g離心15min，棄上清，然后用100mM NaCl溶液，25mM Trisacetate緩沖液重懸后繼續(xù)16 110g離心10min，棄上清，最后用300mM NaCl和25mM Trisacetate混合液重懸，即可得到納米金標(biāo)記的探針鏈溶液，4℃避光保存。
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