[發明專利]一種犬臍帶來源的間充質干細胞培養基和培養方法

有效

• 申請號: 202010976166.2
• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112080464B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 王國棟;張樹潤;李欣懿
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明動物研究所;北京中科昆朋生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 庹玖玲;萬志香

1.一種間充質干細胞的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采集新生犬臍帶；

(2)將步驟(1)獲得的臍帶進行清洗，剔除臍帶動脈及靜脈，剪碎；

(3)使用消化液進行消化，獲得臍帶間充質干細胞；

(4)使用培養基對步驟(3)獲得的臍帶間充質干細胞進行培養，

所述培養基包含以下濃度的組分：10～20v/v％FBS、0.8～1.2mM丙酮酸鈉、0.08～0.15mM甘氨酸、0.08～0.15mM L-丙氨酸、0.08～0.15mM L-天冬酰胺、0.08～0.15mM L-天冬氨酸、0.08～0.15mM L-谷氨酸、0.08～0.15mM L-脯氨酸、0.08～0.15mM L-絲氨酸、2～6mM谷氨酰胺；

步驟(3)所述消化液的制備方法如下：0.2w/v％膠原酶IV、0.25w/v％胰酶、0.1w/v％透明質酸酶按體積比為2：(0.5～1)：(0.5～1)混合均勻。

2.根據權利要求1所述的間充質干細胞的培養方法，其特征在于，所述培養基包含以下濃度的組分：10～15v/v％FBS、0.9～1mM丙酮酸鈉、0.1～0.12mM甘氨酸、0.1～0.12mM L-丙氨酸、0.1～0.12mM L-天冬酰胺、0.1～0.12mM L-天冬氨酸、0.1～0.12mM L-谷氨酸、0.1～0.12mM L-脯氨酸、0.1～0.12mM L-絲氨酸、2～4mM谷氨酰胺。

3.根據權利要求1所述的間充質干細胞的培養方法，其特征在于，所述培養基中還含有抗生素。

4.根據權利要求1所述的間充質干細胞的培養方法，其特征在于，所述培養基的溶劑為低糖DEME培養基。

5.根據權利要求1所述的間充質干細胞的培養方法，其特征在于，所述消化液的制備方法如下：將0.2w/v％膠原酶IV、0.25w/v％胰酶、0.1w/v％透明質酸酶按體積比為2：1：1混合均勻。

6.根據權利要求1～5任一項所述的間充質干細胞的培養方法，其特征在于，所述消化液的反應條件為37±1℃消化25～35min。

7.根據權利要求6所述的間充質干細胞的培養方法，其特征在于，所述消化液的反應條件為37±1℃消化30min。