[發(fā)明專利]一種改良的豬腦組織石蠟切片免疫組化染色方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010973955.0
• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112198036A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊鴻;羅穎;張先東;徐志高;梁浩釗;鄧樺
• 申請（專利權(quán)）人: 佛山科學技術(shù)學院
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N33/532;G01N33/533
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 劉俊文

本發(fā)明生物醫(yī)學技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種改良的豬腦組織石蠟切片免疫組化染色方法，在有效降低了抗原修復液成本的情況下利于抗原的表達，同時也解決了修復方式不當引起修復過程中的掉片現(xiàn)象，是一種有效的豬腦組織石蠟切片免疫組化染色方法，應(yīng)用前景廣泛，值得大力推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種改良的豬腦組織石蠟切片免疫組化染色方法。

背景技術(shù)

免疫組化在病理組織學實驗中應(yīng)用廣泛，具有確定組織細胞內(nèi)特定抗原，對其進行定位、定性及相對定量的研究的作用。在進行免疫組化實驗中，封閉方法的選擇，封閉液的種類、使用方法都對結(jié)果有很大的影響，抗原修復液的選擇和使用方式都是決定了組化質(zhì)量的關(guān)鍵因素。組織在制作過程中，由于化學試劑的作用封閉了抗原，又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，致使在免疫組化的染色過程中不能將其顯示出來，為了解決上述的問題，利用化學試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來或修正過來的過程稱為抗原修復。

常規(guī)的豬腦組織免疫組化染色方法包括如下步驟：

1)石蠟切片，脫蠟與水化；

2)0.3％或3％H₂O₂去離子水(無色液體)孵育10-30min，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性；

3)蒸餾水沖洗，PBS浸泡5min3次

4)抗原修復：微波(建議30min內(nèi)4次中火)、高壓、酶修復方法；自然冷卻，再用PBS沖洗3min×3次.

5)血清封閉：室溫15-30min，盡可能與第二抗體來源一致；傾去，勿洗；

6)滴加適當比例稀釋的第一抗體，37℃孵育2～3小時或4℃過夜(最好復溫處理)；PBS沖洗，3min×5次；

7)滴加生物素標記的第二抗體，室溫或37℃孵育30min-1h；

8)PBS沖洗，3min×5次；

9)滴加SP(鏈霉親和素-過氧化物酶)，室溫或37℃孵育30min-1h；10)PBS沖洗，3min×5次；

10)顯色劑顯色；

11)自來水充分沖洗；

12)可進行復染，脫水，透明；

13)選擇適當?shù)姆馄瑒?，封片?/p>

但由于豬腦組織屬于容易掉片的組織，抗原修復時間過長或者溫度不適，易造成組織的脫落；抗原修復液通常使用檸檬酸鹽修復緩沖液，只能一次性使用，因此大大增加了免疫組化的成本；在滴加第一抗體前未將細胞進行破膜，也不利于抗體的進入。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種改良的豬腦組織石蠟切片免疫組化染色方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的一個或多個技術(shù)問題，至少提供一種有益的選擇或創(chuàng)造條件。

為了克服上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種改良的豬腦組織石蠟切片免疫組化染色方法，包括脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與貼片、脫蠟、染色和封片。

作為上述方案的進一步改進，所述脫水過程中采用的脫水劑為無水乙醇。

作為上述方案的進一步改進，所述無水乙醇的體積濃度為50-100％，優(yōu)選為70-100％

作為上述方案的進一步改進，所述脫水試劑中還包括水，優(yōu)選為蒸餾水。

作為上述方案的進一步改進，所述透明過程中采用的透明劑為石蠟。

作為上述方案的進一步改進，所述脫蠟過程中采用的脫蠟劑為二甲苯。