[發(fā)明專利]一種保持細菌活性的dsDNA微波解鏈方法

有效

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• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112111483B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發(fā)明（設計）人: 顧海鷹;張晶;劉曉駿;錢鈺穎;唐浩文;孫巧靈;沙舟
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于微生物特殊處理領域，公開了一種保持細菌活性的dsDNA微波解鏈方法。本發(fā)明提供的dsDNA微波解鏈方法為將經過預處理的大腸桿菌重懸于無菌PBS中，然后20～60℃溫度條件下置于微波下進行處理5～10s，得到仍保持生物活性的大腸桿菌ssDNA。本發(fā)明提供的dsDNA微波解鏈方法可以保證細菌的生物活性，并有助于細菌的跨膜和跨壁電子轉移。

技術領域

本發(fā)明屬于微生物特殊處理領域，具體涉及的是一種保持細菌活性的dsDNA微波解鏈方法。

背景技術

通常解鏈dsDNA的方法是煮沸或強酸處理或者采用生物試劑和化學試劑相結合的方法，由于熱處理和酸處理無疑會導致細菌死亡，而試劑提取DNA時，主要利用溶菌酶并結合其它裂解脂類和蛋白質的酶類一起處理，以破壞細胞壁使核酸物質更好地釋放出來，但是步驟繁瑣且需要大量試劑。

發(fā)明內容

本發(fā)明的主要目的在于提供了一種保持細菌活性的dsDNA微波解鏈方法，該方法能解鏈細菌dsDNA為ssDNA，同時保證細菌的生物活性。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案如下：

一種保持細菌活性的dsDNA微波解鏈方法，所述dsDNA微波解鏈方法為將經過預處理的大腸桿菌重懸于無菌PBS中，然后置于微波下進行處理，得到仍保持生物活性的大腸桿菌ssDNA；

其中所述微波下進行處理的條件為：功率136～160W，溫度20～60℃，時間5～10s。

進一步的，所述微波下進行處理的條件為：功率136W，溫度為室溫，時間為9s。

進一步的，所述微波使用0～200W連續(xù)可調型固態(tài)微波源。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明通過設置特定的微波條件，采用微波方法解鏈細菌dsDNA為ssDNA，同時保證細菌的生物活性，并有助于細菌的跨膜和跨壁電子轉移。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例中大腸桿菌經過功率為136W的微波處理8S、9S、10S后的鳥嘌呤電信號對比圖；

圖2是對照組和不同處理組的大腸桿菌數(shù)目對比圖。

具體實施方式

下面將結合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。

設備選型

(1)單模腔：根據(jù)目前實驗的需要，對直徑20mm左右的電解杯內的樣品進行微波處理，由于多模腔結構的微波功率密度(電磁場強度)較小，不能對試樣進行有效加熱和穩(wěn)定加熱，因此推薦采用單模諧振腔結構。本發(fā)明采用TE101矩形波導單模諧振腔，單模腔具有功率密度高、損耗小、溫度均勻和易于控制等優(yōu)點，已成為主要對低損耗材料進行微波處理的加熱腔。

(2)微波源：由于試驗試劑量較低少，只有3ml左右，因此加熱所需的微波功率也不宜過大，否則無法實現(xiàn)精確溫度控制，以試劑為水計算，如果每分鐘溫升1℃,只需要微波功率0.21W，所以微波源選擇固態(tài)源，不能用磁控管式微波源。本發(fā)明采用0-200W連續(xù)可調型固態(tài)微波源。

實施例1

將冷凍干燥的大腸桿菌(ATCC25922)在37℃的腦心浸液(BHI)中復活18～24h。然后在37℃下將一圈細菌培養(yǎng)物接種到營養(yǎng)肉湯(NB)中24h。之后，通過在室溫下以9000rpm離心10分鐘獲得大腸桿菌，然后將沉淀物通過無菌磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌兩次。最后，將洗滌后的大腸桿菌重懸于無菌PBS中。

將3mL大腸桿菌重懸液采用上述設備在不同條件下進行微波處理，處理溫度為室溫，處理條件分別為：(1)136W 8S；(2)136W 9S；(3)136W 10S；(4)269W 10S。