[發明專利]用于鑒定靈芝原生質體單核體交配型的引物對、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010972213.6
• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112126700A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 王麗寧;黃清鏵;李錦榮
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院生物工程研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

本發明公開了用于鑒定靈芝原生質體單核體交配型的引物對、試劑盒及其應用。本發明公開了用于鑒定靈芝原生質體單核體交配型的三組引物對Glpm_1、Glpm_2和Glpm_3。本發明以待鑒定的靈芝原生質體單核體的基因組DNA為模板，用Glpm_1、Glpm_2和Glpm_3引物擴增，根據檢測所得PCR產物大小來確定其交配型。本發明中的方法簡單易行，縮短了鑒別時間并簡化了鑒別步驟，準確度高，可適用于食藥用菌，尤其是靈芝遺傳育種、基因組學等相關領域的研究。

技術領域

本發明屬于食藥用菌鑒定技術領域，具體涉及用于鑒定靈芝原生質體單核體交配型的引物對、試劑盒及其應用。

背景技術

靈芝(Ganoderma lucidum)在分類上隸屬于擔子菌門(Basidiomycota)，靈芝科(Ganodermataceae)靈芝屬(Ganoderma)。靈芝是傳統珍貴中藥，具有扶正固本等功效。現代藥理和臨床研究表明，靈芝在抗腫瘤、抗病毒、調節血糖、增強免疫力等方面均具有顯著的作用。三萜和多糖是靈芝中主要的活性成分。此外，作為白腐真菌的代表之一，靈芝可以利用自身產生的木質素氧化酶系統將木質素徹底降解為二氧化碳和水，具有極高的利用價值。

單核體菌絲是食藥用菌遺傳和育種研究的重要基礎材料，分為孢子單核體和原生質體單核體。原生質體單核體是營養菌絲的無性后代，可通過雙核菌絲的原生質體單核化技術獲得，遺傳物質未經過遺傳重組等過程，最大程度反映親本的遺傳特征。由于不需要經歷出菇過程，在實驗室條件下具有操作性強，重復性強，耗時較短等優點。

傳統交配型的鑒定通過雜交的方法進行，依賴于兩個單核體雜交后鎖狀聯合的有無判定交配型是否相同或不同。此方法耗時較長，效率較低，且準確性受到實驗人員主觀影響較大。

因此，提供能準確有效的鑒別靈芝原生質體單核體交配型的引物對，并以此為基礎建立一套完整的檢測方法，對于靈芝原生質體單核體的鑒定，乃至食藥用菌/白腐真菌遺傳育種、基因組學等相關領域都具有極為重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供用于鑒定靈芝原生質體單核體交配型的引物對；

本發明的另一目的在于提供一種靈芝原生質體單核體交配型鑒定試劑盒；

本發明的另一目的在于提供一種鑒定靈芝原生質體單核體交配型的方法；

本發明的另一目的在于提供上述引物對在制備靈芝原生質體單核體交配型鑒定制劑中的應用；

本發明的另一目的在于提供上述方法在食藥用菌遺傳育種及基因組學檢測中的應用。

本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一個方面，提供：

用于鑒定靈芝原生質體單核體交配型的引物對，該引物對的核苷酸序列如Glpm_1、Glpm_2和Glpm_3所示：

Glpm_1引物對的核苷酸序列為：

Glpm_1F：5’-ATCTCCTCCATCGCCTGTTC-3’(SEQ ID NO.1)；

Glpm_1R：5’-TCTTGTGACGCTCTGTTCCT-3’(SEQ ID NO.2)；

Glpm_2引物對的核苷酸序列為：

Glpm_2F：5’-TCGTCCTCACTTCCATCCATC-3’(SEQ ID NO.3)；

Glpm_2R：5’-GGTTGTTGCTCGGTCTCATAC-3’(SEQ ID NO.4)；

Glpm_3引物對的核苷酸序列為：

Glpm_3F：5’-GACAACAATGGCAGCACAGAT-3’(SEQ ID NO.5)；