[發明專利]一種利用出芽短梗霉發酵生產超低分子量普魯蘭多糖的方法

有效

• 申請號: 202010971945.3
• 申請日: 2020-09-16
• 公開（公告）號: CN112094752B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 曾偉;梁智群;陳桂光;蔣莉;鄧英麗
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/10;C12R1/645
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來光業

1.一種利用出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）發酵生產普魯蘭多糖的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）菌種活化

將出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）GXZ-6接種于PDA固體斜面培養基中，所述的PDA固體斜面培養基的組成為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蒸餾水定容至1L，自然pH；25~30℃下培養36~48h；所述出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）GXZ-6的保藏編號為CCTCC NO：M 2017517，保藏日期為2017年9月20日，保藏單位：中國典型培養物保藏中心，保藏地址：中國武漢武漢大學；

（2）種子液制備

將整個PDA固體斜面培養基上的菌落接入裝有50mL液體種子培養基的250mL三角瓶中，搖床轉速180~220rpm，25~30℃培養36~48h至菌株對數生長中期，以此作為一級種子液；將50mL一級種子液接入裝有250mL液體種子培養基的3L三角瓶中，搖床轉速180~220rpm，25~30℃培養36~48h至菌株對數生長中期，以此作為二級種子液；所述液體種子培養基濃度組成為：葡萄糖80~100g/L，NH₄Cl 2~4g/L，KCl 0.5~1g/L，KH₂PO₄ 0.1~0.2g/L，MgSO₄·7H₂O0.1~0.2g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.05~0.1g/L，CaCO₃ 20~40g/L，自然pH，蒸餾水配制；

（3）液體發酵

將二級種子液按接種量5~15%（v/v）接入裝有液體發酵培養基的5L發酵罐中，發酵罐裝液量為3.5~4L，轉速200~400rpm，通氣量0.5~1vvm，25~30℃發酵5~7天；所述液體發酵培養基濃度組成為：碳源140~160g/L，NH₄Cl 3~6g/L，KCl 0.5~1g/L，KH₂PO₄ 0.1~0.2g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1~0.2g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.2~0.4g/L，CaCO₃ 20~40g/L，琥珀酸 5~10g/L，自然pH，蒸餾水配制；所述液體發酵培養基的碳源為葡萄糖、蔗糖中的任意一種或其組合；

（4）普魯蘭多糖提取純化

將發酵液離心去除菌體和殘余碳酸鈣，收集上清液并加入2倍體積無水乙醇，輕微攪動后于4℃靜置過夜，離心收集沉淀，冷凍干燥后得到普魯蘭多糖。

2.根據權利要求1所述的利用出芽短梗霉（Aureobasidium pullulans）發酵生產普魯蘭多糖的方法，其特征在于：發酵生產得到的普魯蘭多糖的分子量為2.5×10³~9.0×10³。