[發明專利]IL2RG基因和ADA基因聯合敲除的重組細胞及其在制備免疫缺陷豬模型中的應用有效
| 申請號： | 202010971715.7 | 申請日： | 2020-09-16 |
| 公開（公告）號： | CN112522258B | 公開（公告）日： | 2023-08-22 |
| 發明（設計）人： | 牛冬;汪滔;馬翔;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英 | 申請（專利權）人： | 南京啟真基因工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/62;C12N15/55;C12N15/12;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 何葉喧 |
| 地址： | 211306 江蘇省南京市高淳區經*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | il2rg 基因 ada 聯合 重組 細胞 及其 制備 免疫 缺陷 模型 中的 應用 | ||
1.sgRNA組合或質粒組合在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)：(a)制備重組細胞；(b)制備免疫缺陷動物模型；
所述sgRNA組合，由sgRNAIL2RG-g7和sgRNAADA-g7組成；
所述質粒組合，由質粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)和質粒pKG-U6gRNA(ADA-g7)組成；
所述質粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)是借助限制性內切酶BbsI將sgRNAIL2RG-g7的靶序列結合區的編碼序列插入pKG-U6gRNA載體得到的；所述sgRNAIL2RG-g7的靶序列結合區如SEQ?IDNO：12中第1-20位核苷酸所示；
所述質粒pKG-U6gRNA(ADA-g7)是借助限制性內切酶BbsI將sgRNAADA-g7的靶序列結合區的編碼序列插入pKG-U6gRNA載體得到的；所述sgRNAADA-g7的靶序列結合區如SEQ?ID?NO：22中第1-20位核苷酸所示；
所述pKG-U6gRNA載體如SEQ?ID?NO：3所示。
2.權利要求1中所述的質粒組合和質粒pKG-GE3在共同制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)：(a)制備重組細胞；(b)制備免疫缺陷動物模型；
所述質粒pKG-GE3如SEQ?ID?NO：2所示。
3.sgRNA組合，由sgRNAIL2RG-g7和sgRNAADA-g7組成；
所述sgRNAIL2RG-g7的靶序列結合區如SEQ?ID?NO：12中第1-20位核苷酸所示；
所述sgRNAADA-g7的靶序列結合區如SEQ?ID?NO：22中第1-20位核苷酸所示。
4.質粒組合，由質粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)和質粒pKG-U6gRNA(ADA-g7)組成；
所述質粒pKG-U6gRNA(IL2RG-g7)是借助限制性內切酶BbsI將sgRNAIL2RG-g7的靶序列結合區的編碼序列插入pKG-U6gRNA載體得到的；所述sgRNAIL2RG-g7的靶序列結合區如SEQ?IDNO：12中第1-20位核苷酸所示；
所述質粒pKG-U6gRNA(ADA-g7)是借助限制性內切酶BbsI將sgRNAADA-g7的靶序列結合區的編碼序列插入pKG-U6gRNA載體得到的；所述sgRNAADA-g7的靶序列結合區如SEQ?ID?NO：22中第1-20位核苷酸所示；
所述pKG-U6gRNA載體如SEQ?ID?NO：3所示。
5.一種試劑盒，包括權利要求3所述的sgRNA組合或權利要求4所述的質粒組合；所述試劑盒的用途為如下(a)或(b)：(a)制備重組細胞；(b)制備免疫缺陷動物模型。
6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括質粒pKG-GE3；所述質粒pKG-GE3如SEQ?ID?NO：2所示。
7.權利要求3所述sgRNA組合或權利要求4所述質粒組合或權利要求5所述試劑盒或權利要求6所述試劑盒的應用，所述應用為如下(a)或(b)：(a)制備重組細胞；(b)制備免疫缺陷動物模型。
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