[發(fā)明專利]一種鑒別百色云耳的分子標(biāo)記及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010969709.8
• 申請(qǐng)日: 2020-09-15
• 公開（公告）號(hào): CN111926107B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳圣進(jìn);陳雪鳳;王燦琴;韋仕巖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 廣西中知華譽(yù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 45140
• 代理人: 牙斐穎

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種鑒別百色云耳的分子標(biāo)記及其應(yīng)用，本發(fā)明的引物對(duì)特異性強(qiáng)，能夠?qū)碓从诎偕脑贫鶧NA進(jìn)行特異擴(kuò)增，并能擴(kuò)增出635bp片段，而對(duì)其它地緣的云耳菌株無擴(kuò)增作用。利用上述引物對(duì)可特異性的設(shè)計(jì)針對(duì)百色云耳的分子標(biāo)記、探針和/或試劑盒，對(duì)百色云耳進(jìn)行篩選鑒定，使用上述方法可簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的篩選出來源于百色的云耳菌株，對(duì)百色云耳菌株的遺傳研究及市場(chǎng)推廣有重要的意義。

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種鑒別百色云耳的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】

云耳(Auricularia?heimuer)是我國(guó)南方地區(qū)對(duì)黑木耳的一種俗稱，隸屬于擔(dān)子菌亞門，異擔(dān)子菌綱，木耳目，木耳科，木耳屬。黑木耳在我國(guó)分布廣泛，主產(chǎn)區(qū)包括吉林、黑龍江、遼寧、內(nèi)蒙古、廣西、云南、貴州、四川、湖北、陜西和浙江等省，產(chǎn)量?jī)H次于香菇和平菇，為我國(guó)四大食用菌栽培品種之一。

百色云耳是指自然分布于廣西百色地區(qū)田林縣、田陽(yáng)、右江、凌云、樂業(yè)、隆林、西林和田東等縣(區(qū))的野生黑木耳，屬于典型的適合南亞熱帶植被地理?xiàng)l件生長(zhǎng)的生態(tài)種群。百色云耳是廣西特有的珍貴黑木耳品種，它具有較耐高溫、子實(shí)體泡發(fā)率高、顏色鮮艷、質(zhì)地柔軟、入口柔嫩順滑，口感極佳等優(yōu)異品質(zhì)，曾獲得過全國(guó)外貿(mào)特產(chǎn)一等獎(jiǎng)。

百色云耳菌株與廣西外來的黑木耳商品菌株間存在明顯差異：首先，在菌絲培養(yǎng)特征和子實(shí)體外觀性狀上，前者多數(shù)菌株菌絲培養(yǎng)期間色素發(fā)生早、子實(shí)體顏色較淺而呈半透明狀、子實(shí)體質(zhì)地柔軟而滑嫩、咀嚼性低，后者菌絲培養(yǎng)期間色素發(fā)生晚或無色素、子實(shí)體顏色深而不透明、子實(shí)體質(zhì)地較脆、咀嚼性高；其次，在遺傳背景上，兩者的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，根據(jù)ISSR聚類分析結(jié)果，它們分屬于不同的生態(tài)類群。

盡管百色云耳菌株與廣西外來的黑木耳商品菌株間有以上諸多差異，但子實(shí)體外觀性狀受環(huán)境條件的影響較大，而且缺少量化指標(biāo)，在實(shí)際的生產(chǎn)和科研應(yīng)用中容易導(dǎo)致對(duì)兩者鑒別的失誤；ISSR分析技術(shù)雖然可鑒別區(qū)分兩類黑木耳品種，但該技術(shù)也存在帶型不穩(wěn)定、特征條帶序列不確定等缺點(diǎn)，而且往往需要多個(gè)引物，ISSR的指紋圖譜也復(fù)雜，需要借助軟件分析，工序較繁瑣。為此，有必要開發(fā)一種能簡(jiǎn)單、快速、明晰地鑒別百色云耳菌株與外來黑木耳商品菌株的分子標(biāo)記，能快速的對(duì)百色云耳進(jìn)行區(qū)分。

【發(fā)明內(nèi)容】

鑒于上述內(nèi)容，有必要開發(fā)一種能簡(jiǎn)單、快速、明晰地鑒別百色云耳菌株與外來黑木耳商品菌株的分子標(biāo)記，能快速的對(duì)百色云耳進(jìn)行區(qū)分。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

分子標(biāo)記引物對(duì)，所述分子標(biāo)記引物對(duì)的

上游引物序列為：5’-CAGATATGCAGCACATCACAC-3’；

下游引物序列為：5’-CCAACCAAACCAGAAACATCC-3’。

本發(fā)明還包含所述分子標(biāo)記引物對(duì)的探針和/或試劑盒。

本發(fā)明還包括所述分子標(biāo)記引物對(duì)和所述探針和/或試劑盒在鑒別百色云耳上的應(yīng)用。

本發(fā)明還包括應(yīng)用所述分子標(biāo)記引物對(duì)和/或所述探針和/或試劑盒鑒定百色云耳的方法，所述方法為：提取不同云耳樣本的DNA，然后與所述引物對(duì)、探針或試劑盒進(jìn)行PCR反應(yīng)，凝膠電泳檢測(cè)，如果能擴(kuò)增出635bp證明該云耳的種質(zhì)來源地來源于廣西百色，如果不能擴(kuò)增出635bp證明該云耳的種質(zhì)來源地并非來源于廣西百色。

進(jìn)一步的，所述PCR反應(yīng)的反應(yīng)體系為：2×Es?TaqMasterMix?11.5μL、ddH₂O?10.5μl、10μmol/L上游引物1μl、10μmol/L下游引物1μl、待測(cè)黑木耳菌株基因組DNA?1μl