[發明專利]一種臨床血性胸水細胞蠟塊及其制備方法

在審

• 申請號: 202010968047.2
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112082836A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 黃幼生;薛逢貴;羅志飛
• 申請（專利權）人: 海南醫學院第一附屬醫院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30;G01N1/36
• 代理公司: 海南盛億專利代理事務所(普通合伙) 46005
• 代理人: 吳燕梅

本發明公開了一種臨床血性胸水細胞蠟塊的制備方法，包括取血性胸水離心獲得沉淀物；往沉淀物加入紅細胞裂解液，混勻后靜止獲得紅色透明膠體狀液體，紅細胞裂解液由氯化銨，碳酸氫鈉和乙二胺四乙酸二鈉組成；經過二次離心至沉淀表面變淺或無紅色沉淀產生，獲得第二沉淀物；加入乙醇溶液，混勻后靜止使沉淀成團，再離心獲得第三沉淀物；加入海藻酸鈉溶液，攪拌混勻，離心后加入氯化鈣溶液，直至細胞團凝結成凝膠塊，取出凝膠塊包裹并脫水處理后，用石蠟包埋沉淀物獲得細胞蠟塊。本方法制備的細胞蠟塊經HE染色顯示無紅細胞殘留，癌細胞無變形，核質染色紅藍分明，核膜核仁清晰，核內染色均質狀，癌細胞團形態保存好，可見腺樣結構排列，背景干凈。

技術領域

本發明涉及醫療生物技術領域，尤其涉及一種臨床血性胸水細胞蠟塊及其制備方法。

背景技術

臨床細胞病理工作中，常規的胸水涂片因制作簡單可快速進行臨床診斷，利用細胞蠟塊進行免疫組織化學及分子生物學方法鑒別使細胞病理診斷更加精準化。然而細胞蠟塊的制作要求嚴格，尤其是臨床血性胸水，如果標本前期血細胞處理不好，制成的細胞蠟塊含紅細胞過多，腫瘤細胞占比低數量少，不利于常規HE染色病理診斷；紅細胞同時也將導致免疫組織化學染色背景過高造成判讀困難；切片腫瘤細胞含量少，所提取的DNA濃度低，不利分子病理診斷。

現有的標本處理所用紅細胞裂解液一般為15-50％乙醇溶液、1-3％乙酸溶液或前兩者不同比例的混合，如專利CN201711341745.4公開了一種基于血性細胞樣本的細胞蠟塊的制備方法及細胞蠟塊，將血性細胞樣本清洗后，離心收集第一沉淀樣本，加入第二固定液，混合均勻后二次離心得第二沉淀，將第二沉淀脫水透明、浸蠟以及包埋。其中固定液為乙醇乙酸液，乙醇乙酸液由體積分數為24-25.5％的乙醇與乙酸按照體積比為18-19：1混合而得。但實際使用中發現該裂解液在裂解紅細胞的同時可使部分紅細胞膜表面蛋白質變性，使得紅細胞凝結成褐色凝塊，殘留在細胞沉淀中。因此存在紅細胞裂解不徹底，將造成免疫組織化學染色非特異性著色，腫瘤細胞比例少，從而影響結果判讀。另外由于紅細胞裂解較徹底，沉淀物量較少，剩余有核細胞濃度高，不易凝結成團且易碎，用工具挖取難度大大增加，而利用傳統方法如瓊脂法或明膠法，其操作繁瑣且過程需要加溫，造成細胞損傷；雞蛋清法其原材料不易保存，且其含有的蛋白成分會影響免疫組織化學的染色。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種臨床血性胸水細胞蠟塊的制備方法，解決了現有制備方法在裂解紅細胞時容易引起細胞膜表面蛋白質變性，使得紅細胞凝結成褐色凝塊且沉淀不易提取，從而影響結果判讀的問題。

本發明采用的技術手段如下：一種臨床血性胸水細胞蠟塊的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S101：取血性胸水標本，第一次離心獲得第一次沉淀物；

S102：往第一次沉淀物加入紅細胞裂解液，混勻后靜止獲得紅色透明膠體狀液體，所述紅細胞裂解液由氯化銨，碳酸氫鈉和乙二胺四乙酸二鈉組成；

S103：經過第二次離心至沉淀表面變淺或無紅色沉淀產生，若有較多紅色沉淀可重復S102直至無紅色沉淀即可，獲得第二次沉淀物；

S104：往第二次沉淀物加入乙醇溶液，充分混勻后靜止使細胞沉淀成團，第三次離心獲得第三沉淀物；

S105：往第三沉淀物加入海藻酸鈉溶液，攪拌混勻，第四次離心后緩慢加入氯化鈣水溶液，直至細胞團凝結成凝膠塊，將凝膠塊取出脫水、浸蠟及包埋獲得細胞蠟塊。

優選地，紅細胞裂解液由8g氯化銨，0.84g碳酸氫鈉和0.37g乙二胺四乙酸二鈉，加水至1000mL定容獲得。

優選地，海藻酸鈉水溶液由0.5g海藻酸鈉和50mL蒸餾水，加入離心管在60℃水浴過夜至完全溶解獲得。

優選地，氯化鈣水溶液通過稱取5.5g氯化鈣和50mL蒸餾水配置獲得。