[發明專利]一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法

在審

• 申請號: 202010967323.3
• 申請日: 2020-09-15
• 公開（公告）號: CN112198247A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 邢金松;李浩
• 申請（專利權）人: 上海熙華檢測技術服務有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 尹均利

1.一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1，儀器與試劑、樣本選擇；

S2，溶液配制；

S3，人血漿樣品處理；

S4，標準曲線樣品制備。

2.根據權利要求1所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述步驟S1儀器與試劑、樣本選擇中，儀器包括高效液相色譜儀、分析天平、自動調配四元泵、高速離心機、真空干燥箱，試劑包括乙酸乙酯、二氯甲烷、水、緩沖液、乙腈、三氟乙酸，樣本為人血漿樣品。

3.根據權利要求1所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述步驟S2溶液配制：將乙酸乙酯、二氯甲烷按照體積比4:1混合制備成提取劑；將乙腈、三氟乙酸、水按照體積比82:18:0.1配制成流動相。

4.根據權利要求1所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述S3中人血漿樣品處理的具體步驟包括如下：

1)實驗人員將待檢測用人血漿樣品置于離心管中；

2)向離心管中加入內標溶液，之后再加入緩沖液；

3)使用渦旋混合器對離心管進行快速渦旋；

4)向離心管中加入步驟S2中配制的提取劑；

5)啟動渦旋混合器對離心管進行快速渦旋混合，之后靜置；

6)將離心管放置在高速離心機內進行離心處理；

7)使用膠頭滴管吸取有機層另一個離心管內，并將離心管放置在真空干燥箱內真空干燥；

8)加入流動相液，之后快速震蕩30s，保證所有的殘渣完全溶解,之后以使用高速離心機進行離心，得到待測樣品；

9)使用膠頭滴管吸取上清液，滴加至試樣瓶中，采用LC-MS/MS法測定待測樣品中沙格列汀的含量。

5.根據權利要求4所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述S3，人血漿樣品處理中步驟3)快速渦旋時間為5s，渦旋轉速為3000rpm。

6.根據權利要求4所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述S3，人血漿樣品處理中步驟5)渦旋時間為2min，靜置時間為1.5min。

7.根據權利要求4所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述S3，人血漿樣品處理中步驟6)與步驟8)中高速離心機均以15000r/min的速度高速離心5min。

8.根據權利要求4所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述S3，人血漿樣品處理中步驟7)中真空干燥機設定溫度為44℃，烘干至離心管內部全干。

9.根據權利要求4所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述S3，人血漿樣品處理中步驟9)中色譜及質譜條件為Eclipse plusC18柱，4.6X100mm，600bar，柱溫：40℃，進樣體積：5μL。

10.根據權利要求1所述的一種人血漿中沙格列汀含量的檢測方法，其特征在于：所述S4，標準曲線樣品制備中取沙格列汀以乙腈溶液,溶解后定容，配制成濃度為1.00mg/mL的儲備液，以乙腈：水體積比為3:1逐級稀釋，得到混合標準系列工作溶液，使用人空白血漿稀釋該工作溶液，制成標準曲線樣品，以上述條件檢測，并根據檢測結果繪制相應的沙格列汀標準曲線。