[發(fā)明專利]測(cè)定人血漿中依巴斯汀及代謝物卡瑞斯汀濃度的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010967107.9
• 申請(qǐng)日: 2020-09-16
• 公開（公告）號(hào): CN112067720A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃建國(guó);易木林;周群;羅熙;周璇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南慧澤生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種測(cè)定人血漿中依巴斯汀及代謝物卡瑞斯汀濃度的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的配制：稱取依巴斯汀和卡瑞斯汀分別于容量瓶中，經(jīng)甲醇溶解配制成標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液；將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液用80％甲醇水溶液稀釋，分別配制成標(biāo)準(zhǔn)系列的依巴斯汀工作溶液和卡瑞斯汀工作溶液；

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣本的制備：分別取標(biāo)準(zhǔn)系列的依巴斯汀工作溶液和卡瑞斯汀工作溶液，分別稀釋到空白血漿中，配制成濃度為0.025～8ng/ml的依巴斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品和濃度為2.5～800ng/ml的卡瑞斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品；

3)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的繪制：取標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品，加入混合內(nèi)標(biāo)工作溶液，渦旋，加入乙腈沉淀劑沉淀后，渦旋、離心后，進(jìn)樣LC-MS/MS系統(tǒng)，得到色譜圖；根據(jù)得到的色譜圖中依巴斯汀峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值計(jì)算依巴斯汀在血漿中的濃度，制定依巴斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程；根據(jù)得到的色譜圖中卡瑞斯汀色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值計(jì)算卡瑞斯汀在血漿中的濃度，制定卡瑞斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定人血漿中依巴斯汀及代謝物卡瑞斯汀濃度的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液的濃度為1mg·mL^-1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定人血漿中依巴斯汀及代謝物卡瑞斯汀濃度的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)系列的依巴斯汀工作溶液的濃度為160、128、80、40、20、4、1、0.5ng/mL；所述標(biāo)準(zhǔn)系列的卡瑞斯汀工作溶液為：16000、12800、8000、4000、2000、400、100、50ng/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定人血漿中依巴斯汀及代謝物卡瑞斯汀濃度的方法，其特征在于，所述依巴斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品的濃度為0.025、0.05、0.2、1、2、4、6.4、8ng/mL；所述卡瑞斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品的濃度為2.5、5、20、100、200、400、640、800ng/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定人血漿中依巴斯汀及代謝物卡瑞斯汀濃度的方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的獲取過程如下：取標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品各50μL，加入混合內(nèi)標(biāo)工作溶液20μL，渦旋30s，分別加入300μL乙腈沉淀劑沉淀后，渦旋5min，離心2490g，4℃，10min；7μL進(jìn)樣LC-MS/MS系統(tǒng)，得到色譜圖；根據(jù)得到的色譜圖中依巴斯汀峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值計(jì)算依巴斯汀在血漿中的濃度，制定依巴斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程；根據(jù)得到的色譜圖中卡瑞斯汀色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值計(jì)算卡瑞斯汀在血漿中的濃度，制定卡瑞斯汀標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定人血漿中依巴斯汀及代謝物卡瑞斯汀濃度的方法，其特征在于，所述混合內(nèi)標(biāo)工作溶液的配制過程如下：稱取富馬酸依巴斯汀-d₅和卡瑞斯汀-d₅分別于容量瓶中，經(jīng)甲醇溶解配制成1mg·mL^-1內(nèi)標(biāo)對(duì)照品儲(chǔ)備溶液；將依巴斯汀-d₅內(nèi)標(biāo)對(duì)照品儲(chǔ)備溶液用80％甲醇水溶液稀釋，得濃度為10ug·mL^-1的YBST-d₅內(nèi)標(biāo)工作液；

取YBST-d₅內(nèi)標(biāo)工作液50μL置于100ml棕色容量瓶中，加入30μL卡瑞斯汀-d₅內(nèi)標(biāo)對(duì)照品儲(chǔ)備液，用80％甲醇水定容至刻度線，搖勻，即得濃度為YBST-d₅/KRST-d₅＝5/300ng·mL^-1的混合內(nèi)標(biāo)工作液。