[發明專利]檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3和Ty-3a的KASP引物及其應用

有效

• 申請號: 202010962510.2
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN111961749B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 康忱;吳志明;王鵬;李亞棟;田哲娟;王美娥
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院經濟作物研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊海天知識產權代理有限公司 13101
• 代理人: 田文其

1.檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3和Ty-3a的KASP引物，其特征在于所述KASP引物序列包含：

正向引物Ty-3-F1：5’-AGATTTTAGCACATTCAATGACCG-3’，其序列如SEQNo.1；

正向引物Ty-3-F2：5’-AGATTTTAGCACATTCAATGACCA-3’，其序列如SEQNo.2；

所述正向引物Ty-3-F1和正向引物Ty-3-F2分別與不同的標簽序列相連；

正向引物Ty-3a-F1：5’-GTGATTGCTTTATTGGAAACCA-3’，其序列如SEQNo.3；

正向引物Ty-3a-F2：5’-GTGATTGCTTTATTGGAAACCG-3’，其序列如SEQNo.4；

所述正向引物Ty-3a-F1和正向引物Ty-3a-F2分別與不同的標簽序列相連接；

合成所述正向引物Ty-3-F1和Ty-3a-F1時，分別在其5’端加上序列為：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’的標簽序列A，其序列如SEQ?No.11；合成所述正向引物Ty-3-F2和Ty-3a-F2時，分別在其5’端加上序列為5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’的標簽序列B，其序列如SEQ?No.12；

所述的KASP引物序列為：

檢測Ty-3基因的正向引物1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGATTTTAGCACATTCAATGACCG-3’，其序列如SEQ?No.5；

檢測Ty-3基因的正向引物2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGATTTTAGCACATTCAATGACCA-3’，其序列如SEQ?No.6；

檢測Ty-3a基因的正向引物A：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGTGATTGCTT?TATTGGAAACCA-3’，其序列如SEQ?No.7；

檢測Ty-3a基因的正向引物B：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGTGATTGCTT?TATTGGAAACCG-3’，其序列如SEQ?No.8；

KASP引物中還包括：

反向引物Ty-3-R：5’-TTTATGCCACACAGAAATCCTAATG-3’，其序列如SEQNo.9；

反向引物Ty-3a-R：5’-TGATTTGATAGATTCTCCAGAGCG-3’，其序列如SEQNo.10。

2.用于檢測番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3和Ty-3a的試劑盒，其特征在于包含權利要求1所述的KASP引物。

3.根據權利要求1所述的KASP引物或權利要求2所述的試劑盒在鑒定番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3和Ty-3a中的應用。

4.根據權利要求1所述的KASP引物或權利要求2所述的試劑盒在鑒定番茄中是否含有番茄黃化曲葉病毒病抗病基因Ty-3或Ty-3a中的應用。

5.根據權利要求1所述的KASP引物或權利要求2所述的試劑盒在鑒定或區分含有Ty-3的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄和不含有Ty-3的感番茄黃化曲葉病毒病的番茄；區分含有Ty-3a的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄和不含有Ty-3a的感番茄黃化曲葉病毒病的番茄中的應用。

6.根據權利要求1所述的KASP引物或權利要求2所述的試劑盒在區分含有Ty-3基因的純合的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄Ty-3/Ty-3、不含Ty-3基因的純合的感番茄黃化曲葉病毒病的番茄ty-3/ty-3和含有Ty-3基因的雜合的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄Ty-3/ty-3；區分含有Ty-3a基因的純合的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄Ty-3a/Ty-3a、不含Ty-3a基因的純合的感番茄黃化曲葉病毒病的番茄ty-3/ty-3和含有Ty-3基因的雜合的抗番茄黃化曲葉病毒病的番茄Ty-3a/ty-3中的應用。

7.根據權利要求1所述的KASP引物或權利要求2所述的試劑盒在Ty-3或Ty-3a基因在番茄抗番茄黃化曲葉病毒育種中的應用。

8.根據權利要求3-7中任一項所述的應用，其特征在于利用所述的KASP引物或所述的試劑盒擴增待檢測的番茄樣品，檢測和分析擴增產物。