[發明專利]檢測微衛星BAT25位點穩定性的引物對、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202010961443.2
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN114182011B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 傅新暉;蔡亞城;黃京林;林漢杰;陳志婷;譚小麗;黃艷;蘭平;汪建平
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第六醫院;中山大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 王秉麗

本發明提供一種檢測微衛星BAT25位點穩定性的引物對、試劑盒及方法。所述引物對具有如SEQ?ID?NO:1所示的堿基序列以及如SEQ?ID?NO:2所示的堿基序列。本發明的引物對檢測靈敏度以及特異性都較高，采用本發明的引物進行HRM法檢測微衛星BAT25位點穩定性時，準確、快速且成本低廉，能夠滿足臨床需求，應用前景廣泛。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地涉及一種檢測微衛星BAT25位點穩定性的引物對、試劑盒及方法。

背景技術

結直腸癌(colorectal?cancer，CRC)是最常見的惡性腫瘤之一，在世界范圍內的惡性腫瘤疾病當中，其發病率高居第3位，死亡率在惡性腫瘤行列高居第2位，在消化道惡性腫瘤中占全球發病和死亡首位，嚴重威脅著人類的健康與生存。近年來隨著中國民眾生活方式及飲食結構的變化，它已成為我國消化系統發病率第二位，患病率第一位的惡性腫瘤。微衛星不穩定性(microsatellite?instability，MSI)是結直腸癌發病的重要原因，在預測腸癌患者預后及化療反應方面也有重要作用，同時對Lynch綜合征的診斷具有重要意義。

近年來，MSI的相關臨床和基礎方面研究取得較好的進展，對MSI與CRC的關系取得深入認識。2016年，美國國家癌癥綜合治療聯盟(NCCN)在《結直腸癌臨床實踐指南》(2016.V2)指出，Lynch綜合征應行MSI或錯配修復(mismatch?repair，MMR)檢測：1)70歲及以下診斷結直腸癌患者以及符合Bethesda指南的大于70歲患者均應行Lynch綜合征腫瘤檢測；2)所有Ⅱ期患者均應行MSI或MMR檢測，因為MSI-H的Ⅱ期患者預后較好，且不會從5-氟尿嘧啶單藥輔助治療獲益。對于具有MSI-H特征的Ⅱ期結腸癌，組織分化差不再認為是高危因素。此外，NCCN指南指出，對局部晚期、復發性或轉移性的胃癌患者，考慮PD-1抑制劑治療前，需行MSI或MMR檢測。FDA已批準抗PD-1藥pembrolizumab，用于不可切除或轉移性MSI-H或dMMR的實體腫瘤的二線或后續治療選擇。BAT25是結直腸癌微衛星不穩定性檢測的重要位點之一，當發生不穩定時單核苷酸重復數會出現改變。

目前，檢測微衛星不穩定性的方法包括：MMR蛋白免疫組化法、DNA測序、片段分析法、高效液相色譜技術、高分辨率熔解曲線(high-resolution?melt，HRM)法等。其中：片段分析法是目前公認的金標準方法；但該方法成本較高，檢測時間較長，并且必須在價格昂貴的測序儀上進行分析，大部分實驗室無法開展檢測(V?Deschoolmeester?et?al.，Detection?of?microsatellite?instability?in?colorectal?cancer?using?analternative?multiplex?assay?of?quasi-monomorphic?mononucleotide?markers，J?MolDiagn，2008,10(2):154-9)。HRM法是基于核酸的物理性質進行分析，只需在常規PCR基礎上增加一些飽和染料，熔解曲線的形狀取決于GC含量、片段長度和產物序列，通過熔解曲線的差異即可分辨；樣品經PCR擴增后直接進行HRM分析，PCR產物無需再轉入其它分析裝置，而直接在同一個PCR管內進行分析，實現閉管操作，具有快速、低成本、靈敏性高等優點，同時只需在熒光定量PCR儀上即可進行分析。然而，HRM法對引物設計的要求很高：引物既要有很好的特異性，又要求其擴增出的片段足夠短，才能獲得較好的檢測靈敏度。基于此，HRM法還未成功應用于BAT25位點穩定性的檢測。

發明內容

基于此，本發明的主要目的是提供一種檢測微衛星BAT25位點穩定性的引物對、試劑盒及方法。采用本發明的引物對衛星BAT25位點穩定性進行檢測，靈敏度高，特異性好。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種檢測微衛星BAT25位點穩定性的引物對，所述引物具有如SEQ?ID?NO:1所示的堿基序列以及如SEQ?ID?NO:2所示的堿基序列。