[發(fā)明專利]甘藍型油菜Bna.A08IDD7基因啟動子及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010956413.2
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN112011541B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧坤;劉緒梅;段回春;曲存民;李加納
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 重慶航圖知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

本發(fā)明公開了甘藍型油菜Bna.A08IDD7基因啟動子及其應(yīng)用，該啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，能夠在擬南芥的根、葉、莖、花、角果、種子等組織中都具有很強的表達；表明該序列具有很強的組成型啟動子的表達活性與特征，并能作為強組成型啟動子應(yīng)用于植物基因工程研究中。因此，該啟動子不僅創(chuàng)建優(yōu)良種質(zhì)資源等基因工程研究方面，具有良好的應(yīng)用潛力，且可代替目前植物基因工程研究中常用的花椰菜花葉病毒(CaMV)35S啟動子，構(gòu)建植物轉(zhuǎn)基因表達載體，應(yīng)用于植物基因工程，廣泛培育具有較高生物安全性轉(zhuǎn)基因植物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及甘藍型油菜Bna.A08IDD7基因啟動子，還涉及該啟動子的應(yīng)用。

背景技術(shù)

我國是世界上最大的油菜(Brassica napus)生產(chǎn)國和菜籽油消費國，每年可提供優(yōu)質(zhì)食用油約520萬t，占國產(chǎn)植物油的47％。但是，目前我國食用植物油供給形勢仍較為嚴峻，自產(chǎn)量不足，嚴重威脅到了我國的食用植物油安全。油菜生產(chǎn)主要利用冬閑田，不與糧食作物爭地，目前長江流域尚有冬閑田66hm²以上，具有巨大的發(fā)展油菜產(chǎn)業(yè)的潛力。

植物基因啟動子在基因的表達調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，位于結(jié)構(gòu)基因5'端上游區(qū)域，可被RNA聚合酶識別并與其結(jié)合，并準確起始轉(zhuǎn)錄一段含有順式作用元件的特異DNA序列。啟動子作為重要的順式作用元件不但決定著轉(zhuǎn)錄方向、效率和其使用的RNA聚合酶的類型，而且通過與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，還精確的控制基因表達的時間、空間以及強度。根據(jù)啟動子的轉(zhuǎn)錄模式可分為組成型、組織特異型和誘導(dǎo)型啟動子。組成型啟動子控制的基因的表達大體恒定在一定水平上，在不同組織部位表達水平?jīng)]有明顯差異，其特點是表達持續(xù)、RNA和蛋白表達量相對恒定，不表現(xiàn)出時空和器官特異性、不受外界因素的誘導(dǎo)。因此，進行啟動子研究對基因表達調(diào)控機制和植物基因工程方面具有重要的科學(xué)意義。

基因工程的研究與應(yīng)用離不開啟動子，挖掘有應(yīng)用價值的啟動子一直是植物分子育種的重要研究領(lǐng)域。近些年來，有關(guān)油菜啟動子的研究不斷有報道。陽永學(xué)(2016)等克隆油菜半胱氨酸蛋白酶家族基因BnCP51的啟動子序列，通過轉(zhuǎn)基因功能驗證該啟動子僅在花蕾和花藥器官中表達，是一種組織特異型啟動子；陳松(2017年)等研究表明油菜ALS基因啟動子能驅(qū)動GUS報告基因在煙草幼苗各個器官中表達，是一個強組成型啟動子；華兆暉(2018年)等從油菜中克隆BnaC05g31880D的啟動子，驗證該啟動子驅(qū)動的下游基因在根、莖、葉、花、角果皮、胚珠、種皮和成熟種子中都有很強表達，也是一種組成型啟動子。相信隨著時間，會越來越多油菜基因的啟動子被發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用。

目前在基因工程研究中應(yīng)用較多的啟動子，主要為花椰菜花病毒的啟動子(CaMV)35S，是一個來源于植物DNA病毒的組成型表達的啟動子，可驅(qū)動外源基因在大部分植物中表達。但畢竟不是來源于植物，在植物基因工程中應(yīng)用此啟動子會存在潛在的生物安全風(fēng)險。所以，挖掘新的高表達活性且生物安全風(fēng)險相對低的植物來源的啟動子顯得尤其重要。油菜是重要的食用油來源，通過轉(zhuǎn)基因來提高油菜的產(chǎn)量、含油量和抗性等性狀是科研工作者炙手可熱的課題，那么篩選油菜內(nèi)源的組成型表達啟動子就很有必要。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種甘藍型油菜Bna.A08IDD7基因啟動子；

為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：