[發明專利]用于檢測新冠肺炎病毒的MIA引物、探針、試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202010955962.8
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN112094947A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 姚航平;陳喆;梁利國;蔣凱
• 申請（專利權）人: 杭州寶臨生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 何碧珩;卓彩霞

本發明公開了用于檢測新冠肺炎病毒的MIA引物、探針、試劑盒及應用。本發明基于NCBI已公示的新冠病毒核衣殼N基因、包膜E基因及ORF1ab區域分別設計MIA引物與探針。本發明的MIA法首次實現COVID?19的ORF1ab、E、N三靶標基因的檢測，檢測時間3～15分鐘，靈敏度達100拷貝/毫升(樣本模板濃度)，與甲乙流、呼吸道合胞等病原體核酸樣本無非特異性交叉反應。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及用于檢測新冠肺炎病毒的MIA引物、探針、試劑盒及應用。

背景技術

新型冠狀病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)，簡稱“新冠肺炎”，世界衛生組織命名為“2019冠狀病毒病”，是指2019新型冠狀病毒感染導致的肺炎。新型冠狀病毒感染的肺炎患者的臨床表現為：以發熱、乏力、干咳為主要表現，鼻塞、流涕等上呼吸道癥狀少見，會出現缺氧低氧狀態。約半數患者多在一周后出現呼吸困難，嚴重者可快速進展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒和出凝血功能障礙。根據發布的“新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)”文件，核酸檢測仍然是確診的優先選擇方案，在該文件中首次添加了血清新型冠狀病毒特異性IgM抗體和IgG抗體陽性作為確診方案，但由于人體產生抗體都處于病情發展的中后期，早期隱形攜帶者無法通過抗體檢測診斷篩選，所以該方法一般只能作為核酸檢測以外的輔助檢測手段。臨床的CT影像、基因測序也是醫生判斷病人是否感染的重要依據，但由于設備的稀缺性及診斷的復雜性，難以推廣。

熒光定量PCR是現階段新冠病毒檢測的優選方案，但其存在以下局限性：(1)易氣溶膠污染導致假陽性，需配備經專業培訓并執PCR上崗證技術人員、專業PCR認證實驗室和價格高昂的分析設備；(2)傳統熒光定量PCR樣本核酸提取和擴增檢測分兩步驟進行，從取樣到檢測結果需要4小時以上。

發明內容

針對上述情況，為克服現有技術的缺陷，本發明提供用于檢測新冠肺炎病毒的MIA引物、探針、試劑盒及應用。

為了實現上述目的，本發明提供以下技術方案：

用于檢測新冠肺炎病毒的MIA引物、探針，針對N基因、E基因、ORF1ab的MIA引物及探針分別為：

N基因

COVID-19-F1:5’-AACTAATCAGACAAGGAACTGATTACAAAC-3’

COVID-19-R1:5’-CTTATTCAGCAAAATGACTTGATCTTTGAA-3’

COVID-19-P1:5’-GCTTCAGCGTTCTTCGGAATGTCGCGC-AT/i6FAMdT/GG/idSp/A/iBHQ1dT/GGAAGTCACACCTTCGGG/iSpC3/-3’

ORF1ab

COVID-19-F2:5’-GAAGCGACAACAATTAGTTTTTAGGAATTTA-3’

COVID-19-R2:5’-CTAAAGGATTTTGTGACTTAAAAGGTAAGTAT-3’

COVID-19-P2:5’-GCGGTATGTGGAAAGGTTATGGCTGTA-GT/i6FAMdT/G/idSp/GA/iBHQ1dT/CAACTCCGCGAAC/iSpC3/-3’

E基因

COVID-19-F3:5’-TAGTTAATAGCGTACTTCTTTTTCTTGCTT-3’

COVID-19-R3:5’-GAATTCAGATTTTTAACACGAGAGTAAACG-3’