[發明專利]一種桑黃抗胰腺癌細胞增殖的有效成分及其制備方法

在審

• 申請號: 202010955029.0
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN112390896A
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 王建功;張信岳;李欽;王星晨;王建文;方錦棋;谷麗麗;武檸子
• 申請（專利權）人: 淳安千島湖桑都食用菌專業合作社
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616
• 代理人: 劉曉明

1.一種桑黃抗胰腺癌細胞增殖的有效成分，其特征在于，所述有效成分為桑黃多糖。

2.根據權利要求1所述的一種桑黃抗胰腺癌細胞增殖的有效成分的制備方法，其特征在于，所述桑黃多糖的制備方法包括以下步驟：

稱取100g桑黃細粉，過75目篩，然后將桑黃細粉加入到40倍水中進行熱水提取，浸提時間為2.5h，浸提溫度為70-80℃，按上述操作重復提取兩次，合并兩次所得提取液；

將桑黃多糖水提液濃縮至原體積的1/6-1/5，在桑黃多糖溶液中加入90％的乙醇，在5-10℃的環境下沉淀10h，以6000r/min離心40-50min得到桑黃多糖溶液；

按所需量稱取DEAE-52Cellulose凝膠干粉，用去離子水浸泡24h，浸泡過程中多次攪拌，靜置后棄去上層雜質，采用濕法裝柱，用去離子水進行洗脫，平衡24h；完成多糖的洗脫后，用0.5mol/L氫氧化鈉浸泡1h，浸泡過程中多次攪拌，靜置后棄去上層雜質，用去離子水洗脫至中性，然后用同體積的0.5mol/L鹽酸浸泡1h，多次攪拌，靜置后棄去上層雜質，用去例子水洗脫至中性，然后再用等體積的0.5mol/L的氫氧化鈉重復上述步驟即可；

桑黃多糖用去離子水溶解，使桑黃多糖溶液的濃度為10mg/mL，沿著層析柱管壁緩緩注入，分別用0.1mol/L氯化鈉、0.3mol/L氯化鈉、0.5mol/L氯化鈉進行階段性洗脫；

將DEAE-52Cellulose柱層析得到的桑黃多糖通過Sephadex G-100柱層析進一步分析鑒定，稱取Sephadex G-100凝膠干粉，加入去離子水浸泡24h，浸泡過程多次攪拌，靜置后棄去上層雜質，超聲脫氣15min，裝柱后用去離子水平衡24h，取DEAE-52Cellulose柱層析分離得到的桑黃多糖，用去離子水溶解，使溶液的濃度為2.5mg/mL，沿著層析柱管壁緩緩注入，用去離子水進行洗脫。

3.根據權利要求1所述的一種桑黃抗胰腺癌細胞增殖的有效成分的制備方法，其特征在于：所述氯化鈉階段性洗脫流速調節為1mL/min。

4.根據權利要求1所述的一種桑黃抗胰腺癌細胞增殖的有效成分的制備方法，其特征在于：所述去離子水洗脫流速為0.5mL/min。