[發明專利]一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法

在審

• 申請號: 202010953810.4
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN114164111A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 徐燕;劉天峰;袁婷婷;張兵;王丹
• 申請（專利權）人: 山東恒信生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 劉燕麗

1.一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)斜面培養基和保藏液的制備；

(2)斜面菌種的制備：將金針菇菌種接種到步驟(1)制備的斜面培養基中；

(3)保藏菌種的制備：取步驟(2)所得斜面培養基基質菌絲塊放于步驟(1)保藏液中封口；

(4)保藏：將所述步驟(3)的金針菇斜面培養基放置于0-6℃恒溫血液培養箱保藏；

所述步驟(1)中，斜面培養基原料包括：馬鈴薯80–400g/L，葡萄糖8–40g/L，瓊脂15–25g/L，大豆蛋白5–15g/L，牛肉膏浸出物5–12g/L，硫酸鎂0.2–1.2g/L，磷酸二氫鉀0.5–2g/L，麥芽粉2–6g/L；

所述步驟(1)中斜面培養基制作步驟如下：取新鮮無芽的馬鈴薯80-400g加入1升的水煮熟，過濾，得到濾液，向濾液內加入葡萄糖8-40g、瓊脂15-25g、大豆蛋白5-15g、牛肉膏浸出物5–12g、硫酸鎂0.2–1.2g、磷酸二氫鉀0.5–2g、麥芽粉2–6g加熱至瓊脂全部溶解，補水定容至1L，將獲得的溶液置于三角瓶內，塞上透氣塞，于119-135℃滅菌30-60min，滅菌完成后待溶液降溫至50-80℃時倒入20mm*200mm試管內擺成斜面，冷卻至完全凝固后得到斜面培養基。

2.如權利要求1所述的一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法，其特征在于，所述步驟(1)中，斜面培養基制作步驟如下：取新鮮無芽的馬鈴薯260g加入1升的水煮熟，過濾，得到濾液，向濾液內加入葡萄糖20g、瓊脂20g、大豆蛋白11g、牛肉膏浸出物7g、硫酸鎂0.8g、磷酸二氫鉀1.1g、麥芽粉4g加熱至瓊脂全部溶解，補水定容至1L，將獲得的溶液置于三角瓶內，塞上透氣塞，于122℃滅菌45min，滅菌完成后待溶液降溫至70℃時倒入20mm*200mm試管內擺成斜面，冷卻至完全凝固后得到斜面培養基。

3.如權利要求1所述的一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法，其特征在于，所述步驟(1)中，斜面培養基的制作步驟如下：按上述質量稱取馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、大豆蛋白、牛肉膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、麥芽粉，先將馬鈴薯切成4mm薄片，加水1升，燒開，水沸騰5min后關火，過濾，取得濾液于燒杯內，加入其它原料，加熱，攪拌至完全溶解，加水定容至1L，用分裝器分裝到試管內，每個試管定容15mL，塞上硅膠塞，試管放于聚丙烯瓶子內，每10支一組，塞子上蓋上鋁箔紙，放于電熱滅菌鍋滅菌，119-135℃滅菌15-25min，滅菌完成后，降溫至60-80℃，擺斜面，培養基占試管2/3-3/4長度，培養基完全凝固后得到斜面培養基。

4.如權利要求1所述的一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法，其特征在于，所述步驟(1)中保藏液為0.8-1g氯化鈉和100mL純水。

5.如權利要求1所述的一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法，其特征在于，所述步驟(1)中保藏液的制備方法法包括如下步驟：取0.80-1g氯化鈉于三角瓶內，加入純水定容至100mL，119-135℃滅菌15-25min，冷卻至常溫得到保藏液。

6.如權利要求1所述的一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法，其特征在于，所述步驟(2)中，斜面培養基的接種操作為，在超凈臺下開啟新風，用酒精對超凈臺內部消毒，用火焰對接種工具消毒，帶接種工具降為室溫后，用接種工具刮除斜面培養基的氣生菌絲，用接種鉤劃3*3*3mm的菌絲塊，用接種鏟取1塊放于待接種的斜面培養基底部3cm處，放于培養箱培養，培養溫度10-20℃，培養8-15天。

7.如權利要求1所述的一種金針菇斜面菌絲塊的保藏方法，其特征在于，將所述步驟(3)的具體方法是，將步驟(2)中所得斜面基質菌絲取(3-6)*(3-6)*(3-6)mm基質菌絲塊置于安瓿瓶內，注入步驟(1)所得保藏液，安瓿瓶火焰封口，置于0-4℃保藏箱保藏。