[發明專利]一種中華刺鰍和大刺鰍的分子鑒別方法有效
| 申請號： | 202010953121.3 | 申請日： | 2020-09-11 |
| 公開（公告）號： | CN111876498B | 公開（公告）日： | 2022-08-30 |
| 發明（設計）人： | 鐘立強;王明華;陳校輝;李大命;唐晟凱;劉燕山 | 申請（專利權）人： | 江蘇省淡水水產研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6806;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249 | 代理人： | 徐激波 |
| 地址： | 210007 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 中華 大刺鰍 分子 鑒別方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種中華刺鰍和大刺鰍的分子鑒別方法，其特征在于：包含以下步驟，
(1)分別提取待鑒定的中華刺鰍和大刺鰍因組DNA；
(2)以提取的基因組DNA為模板，PCR擴增中華刺鰍和大刺鰍的線粒體控制區，得到目的片段的PCR產物；
(3)擴增產物純化后，直接測序，進行中華刺鰍和大刺鰍擴增產物序列比對，序列的第108、110和111位點堿基為C、C和T的是中華刺鰍，序列的第108、110和111位點堿基為T、T和C的則是大刺鰍；
所述的PCR擴增中華刺鰍和大刺鰍的線粒體控制區，其使用的上游引物如序列SEQ IDNO.1，下游引物如序列SEQ ID NO.2。
2.根據權利要求1所述的中華刺鰍和大刺鰍的分子鑒別方法，其特征在于：所述的PCR反應體系為50μL：50ng/μL的模板DNA 1μL，PCR緩沖液5μL，dNTP混合液4μL，每種dNTP0.1mmol/L，10μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2IU的Taq酶；雙蒸水36μL；所述的PCR緩沖液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl 2 ，0.01％明膠組成；PCR擴增反應程序為：94℃預變性2min，94℃變性45s，58℃退火1min，72℃延伸1min，經30個循環后再72℃延伸10min。
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