[發明專利]一種環形RNA敲低方法及其應用有效
| 申請號： | 202010952530.1 | 申請日： | 2020-09-11 |
| 公開（公告）號： | CN112126645B | 公開（公告）日： | 2021-06-01 |
| 發明（設計）人： | 劉明;李自強;王超;劉景磊;蔡秋杰 | 申請（專利權）人： | 廣州吉賽生物科技股份有限公司;中華人民共和國泰安海關 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N9/22;C12N15/867;C12N7/01 |
| 代理公司： | 廣州科沃園專利代理有限公司 44416 | 代理人： | 黃健儀 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市高新技術產業開*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 環形 rna 方法 及其 應用 | ||
1.一種非疾病診斷與治療的環形RNA敲低方法，其特征在于，所述方法是用dCas13蛋白融合表達HRSP12得到融合蛋白，再利用融合蛋白募集RNase P/MRP復合物，實現對環形RNA的特異靶向降解；所述dCas 13蛋白為dPspCas13b，所述dPspCas13b刪除第二個HEPN位點后，得到dPspCas13b-truncated，與HRSP12融合表達融合蛋白，將融合蛋白命名為KDHP-bt，所述KDHP-bt的氨基酸序列為SEQ ID NO.4；所述融合蛋白KDHP-bt通過gRNA靶向環形RNA環化位點處序列。
2.根據權利要求1所述的環形RNA敲低方法，其特征在于，所述dCas13蛋白與HRSP12蛋白之間以柔性linker串聯，柔性linker選自GS、GSGSGS、GGSG、GGSGGGSG、GGSGGS、GGGS、GGGGS中的一種或多種。
3.根據權利要求1所述的環形RNA敲低方法，其特征在于，所述HRSP12蛋白之后串聯一個或多個蛋白標簽，所述蛋白標簽選自Myc、HA、GST、6xHis、Flag、3xFlag中的一種或多種。
4.根據權利要求3所述的環形RNA敲低方法，其特征在于，所述蛋白標簽為3xFlag。
5.一種如權利要求1-4任一所述環形RNA敲低方法中的dCas13-HRSP12融合蛋白的表達載體在瞬時轉染細胞過程中的應用。
6.一種如權利要求1-4任一所述環形RNA敲低方法中的dCas13-HRSP12融合蛋白的表達載體在制備慢病毒顆粒中的應用。
7.一種如權利要求1-4任一所述環形RNA敲低方法中的dCas13-HRSP12融合蛋白在純化RNA中的應用。
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