[發明專利]一種鑒定GALT基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010950644.2
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112143789A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 彭艷華;龔強;余艷;代冰;李慧源;張可可
• 申請（專利權）人: 長沙金域醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 長沙優企知識產權代理事務所(普通合伙) 43243
• 代理人: 周棟

本發明公開了一種鑒定GALT基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒及方法。所述試劑盒中含有如下引物對：F1：GCGCAGTGGAACCGATCCTCTG；R1：CCAAGGGTACTGGGCACCGA；F2：GCGCAGTGGAACCGATCCTGAC；R2：CCAAGGGTACTGGGCACGCG；所述兩個突變位點為C.27GC、C.482TC突變位點。本發明能夠鑒定C.27GC、C.482TC突變位點是在同一條染色體，還是不同的染色體上，工作量小，耗時短，易操作。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢測技術領域，具體涉及一種鑒定PAH基因同時含兩個突變位點(C.27GC、C.482TC)位置的試劑盒及方法。

背景技術

半乳糖血癥(GAL)是一種由于半乳糖代謝通路中酶缺陷所引發的常染色體隱性遺傳代謝病，其中GALT缺乏引起的半乳糖血癥相對常見，也被稱為經典型半乳糖血癥，由GALT基因致病變異所致。人體內半乳糖主要通過Leloir途徑進行代謝，當Leloir途徑中的酶發生缺陷時，體內的半乳糖通過旁路代謝途徑代謝不能達到完全代償，使得半乳糖及其旁路代謝產物堆積，引起半乳糖血癥。經典型半乳糖血癥發生于半乳糖代謝的第2步，即GALT缺乏導致其前體半乳糖-1-磷酸堆積?；純憾嘣趪a期發病，出現腹瀉、嘔吐、低血糖、肝功能損傷等多種并發癥，甚至出現敗血癥、休克和死亡。半乳糖代謝中間產物具有細胞毒性，可能產生智力落后、生長發育遲緩、共濟失調等遠期并發癥。基因檢測發現GALT基因可確診。

不同的GAL基因的突變對GAL活性及結構影響的程度不同。針對于本案中涉及到的兩個突變位點，發生在同一條或者不同的染色體上，對患者病情嚴重程度的影響是不同的。如果兩個突變發生在同一條染色體上，則不致??；兩個突變分別發生在不同的染色體上，則致病。為了評估疾病的嚴重程度，鑒定已知的不同的GAL基因突變分布在同一條還是不同染色體上，對疾病的診斷具有決定性作用?，F有的方法是提取DNA，構建載體，進行體外表達實驗，需要全套的分子生物學及微生物、細胞培養的實驗室，難度極大，且工作量大，耗時長，普通實驗室難以實施。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種鑒定GALT基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒及方法。

為了達到上述目的，本發明提供的技術方案為：

鑒定GALT基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒中含有如下引物對：

F1：GCGCAGTGGAACCGATCCTCTG(SEQ ID NO.1)

R1：CCAAGGGTACTGGGCACCGA(SEQ ID NO.2)

F2：GCGCAGTGGAACCGATCCTGAC(SEQ ID NO.3)

R2：CCAAGGGTACTGGGCACGCG(SEQ ID NO.4)；

所述兩個突變位點為：C.27GC、C.482TC突變位點。

優選地，引物對按如下排列組合使用：

①：F1+R1

②：F1+R2

③：F2+R1

④：F2+R2。

優選地，根據C.27GC、C.482TC突變分布情況，引物對按如下排列組合使用：

①：當待測樣本同時含C.27GC、C.482TC突變但分布在不同染色體上時：F1+R2或F2+R1；其中，F1和R1是檢測野生型的引物；

②當待測樣本同時含C.27GC、C.482TC突變且分布在同一條染色體上時：F2+R2。