[發明專利]對細胞中的靶位點進行基因編輯的方法在審
| 申請號： | 202010949701.5 | 申請日： | 2020-09-10 |
| 公開（公告）號： | CN114164231A | 公開（公告）日： | 2022-03-11 |
| 發明（設計）人： | 張楫欽;楊佳璇;杜冰;劉明耀;席在喜 | 申請（專利權）人： | 華東師范大學;上海邦耀生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/113;C12N5/10;A61K48/00;A61K31/7088;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海一平知識產權代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;徐迅 |
| 地址： | 200241 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細胞 中的 靶位點 進行 基因 編輯 方法 | ||
1.一種對細胞基因組的靶位點進行基因編輯的方法，其特征在于，包括：
(a)提供一待基因編輯的細胞；
(b)將(i)基因編輯酶或其編碼核酸或表達所述基因編輯酶的第一表達載體；和(ii)gRNA或表達所述gRNA的第二表達載體導入所述細胞中，對所述細胞基因組的靶位點進行基因編輯，所述gRNA引導基因編輯酶對靶位點進行定點切割；
其中，所述gRNA靶向的靶向序列包含SEQ ID No.1-9所示的序列中的一個或多個。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因編輯包括基因敲除和基因靶向整合。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因編輯酶選自下組：CRISPR相關蛋白(Cas)多肽、TALEN酶、ZFN酶、或其組合。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶位點選自下組：AAVS1、PD1、TRAC、B2M、或其組合。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因編輯包括定點敲入供體DNA。
6.一種對細胞基因組的靶位點進行基因編輯的gRNA，其特征在于，所述gRNA靶向的靶向序列包含SEQ ID No.1-9所示的序列中的一個或多個。
7.一種用于對細胞基因組的靶位點進行基因編輯的反應體系，其特征在于，所述反應體系包括：
(a)供體DNA，所述供體DNA為雙鏈DNA；
(b)基因編輯酶或其編碼核酸或表達所述基因編輯酶的第一表達載體；
(c)gRNA或表達所述gRNA的第二表達載體；
其中，所述gRNA靶向的靶向序列包含SEQ ID No.1-9所示的序列中的一個或多個。
8.一種用于基因編輯的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：
i)第一容器以及位于第一容器內的供體DNA，所述供體DNA為雙鏈DNA；
ii)第二容器以及位于第二容器內的基因編輯酶或其編碼核酸或表達所述基因編輯酶的第一表達載體；和
iii)第三容器以及位于第三容器內的gRNA或表達所述gRNA的第二表達載體，并且所述gRNA靶向的靶向序列包含SEQ ID No.1-9所示的序列的一個或多個。
9.一種權利要求1所述的方法制備得到的經基因編輯的細胞。
10.一種權利要求9所述的細胞在制備腫瘤免疫治療或癌癥免疫治療產品中的應用。
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