[發(fā)明專利]一種用于評價漿水質(zhì)量的微生物組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010948943.2
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112048454B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發(fā)明（設計）人: 陳朋;周忠坤;劉宇恒;馬萬通;胡樹堅;張仁濤;馬云浩;杜康嘉
• 申請（專利權(quán)）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12Q1/06;C12R1/19;C12R1/25;C12R1/02
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

1.一種快速評價漿水質(zhì)量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)根據(jù)標準菌菌落數(shù)CFU和擴增循環(huán)數(shù)Ct值分別繪制標準曲線，所述標準菌包括大腸桿菌屬任一種菌、乳桿菌屬任一種菌和醋酸桿菌屬任一種菌；

(2)分別獲得待測漿水中微生物組合物中每一組分的qPCR擴增循環(huán)數(shù)Ct值，所述微生物組合物包括選自大腸桿菌屬中的任一種菌、乳桿菌屬中的任一種菌、醋酸桿菌屬中的任一種菌；

(3)分別將步驟(2)所得的Ct值代入到步驟(1)所述對應的標準曲線中，計算獲得微生物組合物中每一組分的菌落數(shù)CFU；

(4)根據(jù)下式①-③獲得的微生物組合物中每一組分的相對菌落數(shù)：

式①Lactobacillus＝X_Lc-X_s1，

式②Acetobacter＝X_aab-X_s2，

式③Enterobacter＝X_Ec-X_s3；

所述X_s1＝4(log(CFU/mL))，所述X_s2＝3(log(CFU/mL))，所述X_s3＝3(log(CFU/mL))；所述X_Lc為檢測獲得的乳桿菌屬的菌落數(shù)CFU，所述X_aab為檢測獲得的醋酸桿菌屬的菌落數(shù)CFU，所述X_Ec為檢測獲得的大腸桿菌屬的菌落數(shù)CFU；

(5)將上式①-③代入綜合評分公式④計算獲得待測漿水的質(zhì)量評分：

式④Z＝a×Lactobacillus+b×Acetobacter+c×Enterobacter；

所述a、b、c根據(jù)灰色關(guān)聯(lián)分析法分析獲得；其中，所述評分越高表示待測漿水的質(zhì)量越好。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的標準菌為大腸桿菌(Escherichia coli)DH5α、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)和醋酸桿菌Acetobacterpasteuri anus。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中qPCR擴增涉及的擴增引物對包括如SEQ ID NO：1-2所示引物對、SEQ ID NO：3-4所示引物對、SEQ ID NO：5-6所示引物對、SEQ ID NO：7-8所示引物對、SEQ ID NO：9-10所示引物對和SEQ ID NO：13-14所示引物對中的至少一對，如SEQ ID NO：15-16所示引物對、SEQ ID NO：17-18所示引物對、SEQ IDNO：19-20所示引物對、SEQ ID NO：21-22所示引物對中的至少一對，如SEQ ID NO：23-24所示引物對、SEQ ID NO：25-26所示引物對、SEQ ID NO：29-30所示引物對、SEQ ID NO：31-32所示引物對、SEQ ID NO：33-34所示引物對和SEQID NO：35-36所示引物對中的至少一對。

4.如權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述步驟還包括：根據(jù)下式⑤計算獲得待測漿水的相對pH值，并根據(jù)下式⑥計算獲得待測漿水的質(zhì)量評分：

式⑤pH＝-[X_pH-(X_s4+X_s5)/2]；

式⑥Z＝a×Lactobacillus+b×Acetobacter+c×Enterobacter+d×pH；

所述X_s4＝3，所述X_s5＝5；所述X_pH為待測漿水的pH值；所述a、b、c、d根據(jù)灰色關(guān)聯(lián)分析法分析獲得，其中，所述評分越高表示待測漿水的質(zhì)量越好。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述式⑥為：Z＝0.2220×Lactobacillus+0.2043×Acetobacter+0.2192×Enterobacter+0.2239×pH。