[發(fā)明專利]一種胎兒地中海貧血致病基因的方法和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010948462.1
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112080564A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳文成;王春芳;元輝雄;常正義;農(nóng)雪娟;胡仁統(tǒng);雷茗;許桂丹;黃華佗
• 申請（專利權(quán)）人: 右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/53
• 代理公司: 昆明合盛知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53210
• 代理人: 牛林濤

1.一種胎兒地中海貧血致病基因的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)胎兒游離DNA富集和分離，取孕婦外周血，加入分離磁珠進(jìn)行胎兒游離DNA富集，富集完成后，采用洗滌液對分離磁珠進(jìn)行洗滌，再采用洗脫液對分離磁珠進(jìn)行洗脫，洗脫完成后，收集上清液即分離得到胎兒游離DNA；

(2)PCR擴(kuò)增，向PCR管中加入PCR反應(yīng)液、高保真DNA聚合酶、引物混合液和步驟(1)分離得到的胎兒游離DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物；

其中，所述PCR反應(yīng)液包括dNTP、MgCl₂和PCR緩沖液；

所述引物混合液包括正向引物和反向引物；

(3)快速層析檢測，將步驟(2)得到的PCR擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物滴加在快速檢測試紙的一端，反應(yīng)液在快速檢測試紙的表面泳動(dòng)層析；

其中，所述快速檢測試紙包括膠體金檢測試紙；

所述膠體金檢測試紙?jiān)O(shè)置有包被有捕獲抗體的檢測線和標(biāo)記有檢測抗體的納米金；

所述檢測線設(shè)置有不少于8條。

(4)檢測結(jié)果判讀，通過檢測線的顯色情況，判斷胎兒地中海貧血致病基因的攜帶情況。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎兒地中海貧血致病基因的方法，其特征在于，所述捕獲抗體為抗地中海貧血致病基因單克隆抗體，所述地中海貧血致病基因包括β珠蛋白突變基因和α珠蛋白突變基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎兒地中海貧血致病基因的方法，其特征在于，所述檢測抗體為抗地中海貧血致病基因單克隆抗體，所述地中海貧血致病基因包括β珠蛋白突變基因和α珠蛋白突變基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎兒地中海貧血致病基因的方法，其特征在于，所述膠體金檢測試紙寬度不小于8mm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎兒地中海貧血致病基因的方法，其特征在于，所述分離磁珠為所及磁珠。

6.一種胎兒地中海貧血致病基因檢測試劑盒，其特征在于，包括分離磁珠、PCR反應(yīng)體系、膠體金檢測試紙和稀釋液，所述PCR反應(yīng)體系包括PCR反應(yīng)液、高保真DNA聚合酶和引物混合液，所述PCR反應(yīng)液包括dNTP、MgCl₂和PCR緩沖液，所述膠體金檢測試紙?jiān)O(shè)置有包被有捕獲抗體的檢測線和標(biāo)記有檢測抗體的納米金，所述檢測線設(shè)置有不少于8條。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的胎兒地中海貧血致病基因檢測試劑盒，其特征在于，所述稀釋液為PCR擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋液，所述PCR擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋液用于將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋一定倍數(shù)后滴加至膠體金檢測試紙一端檢測。