[發明專利]研究MDK基因促進腦膠質瘤增殖功能的方法和應用在審
| 申請號： | 202010944226.2 | 申請日： | 2020-09-10 |
| 公開（公告）號： | CN112941109A | 公開（公告）日： | 2021-06-11 |
| 發明（設計）人： | 魏風;胡北泉;蘭杰;鄒東華;黃賢倫;樊華聲;利麗 | 申請（專利權）人： | 南寧市第一人民醫院 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12Q1/02;C12Q1/6851;C12Q1/6886;G01N33/569;G01N33/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 530000 廣西壯*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 研究 mdk 基因 促進 膠質 增殖 功能 方法 應用 | ||
1.研究MDK基因促進腦膠質瘤增殖功能的方法和應用，包括以下步驟：
(1)RT-qPCR檢測膠質瘤細胞系MDK表達。
根據制造商的指示進行RT-qPCR實驗，檢測膠質瘤細胞系中MDK的表達。
(2)慢病毒介導MDK過表達，方法如下：
利用pMSCV-IRES-GFP載體構建標記MDK的表達質粒，并將該質粒或相應的空載體(NC)轉染293T細胞。通過這些細胞的重組逆轉錄病毒多重感染感染U251-MG細胞，獲得穩定過表達MDK基因(MDK-OE)的細胞系或對照細胞系。
(3)慢病毒載體介導MDK基因敲除，方法如下：
根據引物設計原則，設計3個能夠特異敲除MDK的引物，制備重組MDK-shRNA慢病毒和陰性對照(NC)慢病毒。在T98G細胞系中感染敲除MDK基因的慢病毒載體(MDK-KD)，獲得穩定感染敲除MDK表達的細胞系和對照細胞系。
(4)檢測改變MDK表達對膠質瘤細胞增殖的影響，方法如下：
將細胞接種于96孔板中。在不同時間點，向每個孔中加入CCK-8溶液(10μl)，細胞在37℃下孵育2小時。450nm處下測定吸光度。本實驗重復進行三次，按照制造商說明書檢測細胞增殖情況。
根據制造商的指示進行CCKt-8實驗和EDU增殖試驗。
(5)通過Westernblot分析檢測干擾MDK基因表達后的膠質瘤細胞系中，P-PI3K，PI3K，P-Akt，Akt，p-ERK及N-cadherin、vimentin，beta-catenin的表達水平。
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