[發(fā)明專利]一種噬菌體裂解酶及其基因、基因重組表達(dá)載體與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010943697.1
• 申請(qǐng)日: 2020-09-09
• 公開（公告）號(hào): CN112143747B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王峰;肖瑤;林連兵;鄧征宇;鄧先余;張棋麟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 昆明理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/60
• 分類號(hào): C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/51;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市君勝知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44268
• 代理人: 朱陽(yáng)波

本發(fā)明公開一種噬菌體裂解酶及其基因重組表達(dá)載體與應(yīng)用，其中，所述噬菌體裂解酶表達(dá)基因?yàn)镾EQ ID NO：1的核苷酸序列，所述核苷酸序列可通過構(gòu)建重組載體并在宿主細(xì)胞中表達(dá)噬菌體裂解酶，純化得到的噬菌體裂解酶具有較強(qiáng)的體內(nèi)外殺菌活性，其作用迅速，對(duì)機(jī)體安全無害，所述噬菌體裂解酶可以很好的對(duì)治多重耐藥性志賀氏菌感染，同時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌等病原菌也有一定的抑制作用；所述噬菌體裂解酶在28?42℃范圍內(nèi)具有良好的裂解菌體活性，這些特性使得所述噬菌體裂解酶在制備耐藥感染性疾病藥劑方面具有廣闊的前景，可成為常規(guī)抗生素的替代品或補(bǔ)充品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及噬菌體應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種噬菌體裂解酶及其基因、基因重組表達(dá)載體與應(yīng)用。

背景技術(shù)

自二十世紀(jì)四十年代在臨床實(shí)踐中引入抗生素以來，其在治療人類和動(dòng)物細(xì)菌感染等方面發(fā)揮了巨大作用。但隨著抗生素的濫用，導(dǎo)致幾乎所有細(xì)菌病原體中不受控制的耐藥性決定簇快速出現(xiàn)和擴(kuò)散，當(dāng)前很多細(xì)菌感染對(duì)絕大多數(shù)傳統(tǒng)抗生素來說都變得高度難治。

細(xì)菌耐藥性是指細(xì)菌對(duì)各種抗菌藥物的不敏感性，即對(duì)外來抗菌藥物產(chǎn)生的抵抗力，使其療效變差甚至失去作用。細(xì)菌耐藥性主要分為兩種類型：一種是由基因遺傳介導(dǎo)的，稱為內(nèi)在抗性或先天抗性，它取決于細(xì)菌的結(jié)構(gòu)或化學(xué)成分；另一種則相反，它來自于后天與抗菌藥物之間的相互作用，從而改變了自身的新陳代謝或靶向位點(diǎn)而出現(xiàn)的耐藥性，這種細(xì)菌的自我保護(hù)機(jī)制也稱為獲得性耐藥。通常，對(duì)抗菌藥物敏感的細(xì)菌數(shù)量遠(yuǎn)大于耐藥細(xì)菌的數(shù)量，但是由于濫用抗生素殺死大量非耐藥菌株，這為耐藥細(xì)菌的擴(kuò)散提供了前提條件。同時(shí)，細(xì)菌的耐藥性不僅僅是對(duì)單一藥物的抗性，而是隨著耐藥性的發(fā)展和傳播，多重耐藥性逐漸出現(xiàn)，從而使得預(yù)防和對(duì)治耐藥性細(xì)菌感染越來越困難。

在當(dāng)前各種耐藥菌株，甚至“超級(jí)細(xì)菌”不斷出現(xiàn)的嚴(yán)峻背景下，探索并開發(fā)可以替代或補(bǔ)充抗生素的新型安全抗菌劑就顯得尤為重要和迫切。研發(fā)抗生素替代技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品是無抗養(yǎng)殖時(shí)代最迫切的需求，也是未來細(xì)菌感染性疾病預(yù)防和治療的重要發(fā)展方向。

因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進(jìn)和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種噬菌體裂解酶及其基因、基因重組表達(dá)載體與應(yīng)用，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)缺乏有效預(yù)防和對(duì)治耐藥性細(xì)菌感染的問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種噬菌體裂解酶基因，其中，所述噬菌體裂解酶表達(dá)基因?yàn)镾EQ ID NO：1的核苷酸序列。

所述噬菌體裂解酶表達(dá)基因，其中，所述噬菌體裂解酶表達(dá)基因從長(zhǎng)尾科噬菌體PDS9中分離得到。

一種基因重組表達(dá)載體，其包括本發(fā)明所述的噬菌體裂解酶表達(dá)基因。

一種宿主細(xì)胞，其包括本發(fā)明所述的重組表達(dá)載體。

一種噬菌體裂解酶，其中，所述噬菌體裂解酶的氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示的多肽。

一種噬菌體裂解酶的應(yīng)用，其中，將本發(fā)明所述的噬菌體裂解酶用于制備殺滅耐藥性志賀氏菌的藥劑。

所述噬菌體裂解酶的應(yīng)用，其中，所述藥劑為液劑。

所述噬菌體裂解酶的應(yīng)用，其中，所述藥劑中噬菌體裂解酶的含量不低于10μg/mL。

有益效果：本發(fā)明提供了一種來源于長(zhǎng)尾科噬菌體PDS9且能殺滅耐藥性志賀氏菌的裂解酶和編碼此酶的核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，通過構(gòu)建重組載體并在基因工程菌株大腸桿菌BL21(DE3)中表達(dá)，純化得到的噬菌體裂解酶可以很好的對(duì)治多重耐藥性志賀氏菌感染，同時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌等病原菌也有一定的抑制作用；所述噬菌體裂解酶在28-42℃范圍內(nèi)具有良好的裂解菌體活性，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。

附圖說明