[發(fā)明專利]一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)1,3-丙二醇偶聯(lián)噬菌體制備的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010941901.6
• 申請(qǐng)日: 2020-09-09
• 公開（公告）號(hào): CN112111534B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 修志龍;張志榮;王曉麗;孫亞琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P7/18
• 分類號(hào): C12P7/18;C12N1/20;C12N7/00;C12R1/22
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責(zé)任公司 21212
• 代理人: 李銀姬;李馨

1.一種微生物發(fā)酵生產(chǎn)1,3-丙二醇偶聯(lián)噬菌體制備的方法，包括以下步驟：

（1）將肺炎克雷伯桿菌接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，以甘油為底物進(jìn)行發(fā)酵，生產(chǎn)1,3-丙二醇；

（2）步驟（1）所得發(fā)酵液或從發(fā)酵液中分離得到的菌泥與噬菌體懸液混合，加入培養(yǎng)基進(jìn)行共培養(yǎng)，制備得到噬菌體；

在步驟（2）中，所述培養(yǎng)基為所述肺炎克雷伯桿菌的種子培養(yǎng)基或發(fā)酵培養(yǎng)基，所述共培養(yǎng)的時(shí)間為2~4h；所述種子培養(yǎng)基或發(fā)酵培養(yǎng)基中的甘油濃度為2~60 g/L；

在步驟（1）中，所述發(fā)酵的方式為批式流加發(fā)酵或批次發(fā)酵，總發(fā)酵時(shí)間為7~40 h，發(fā)酵液中1,3-丙二醇濃度為20~80 g/L；

在步驟（2）中，所述噬菌體懸液與菌泥或發(fā)酵液按照噬菌體數(shù)與肺炎克雷伯桿菌細(xì)胞數(shù)之比0.001~ 0.1進(jìn)行混合；

在步驟（2）中，所述共培養(yǎng)后所得到的噬菌體溶液中噬菌體效價(jià)為1×10⁹~1×10¹¹pfu/mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用批式流加發(fā)酵方式時(shí)，向發(fā)酵液中流加甘油，將發(fā)酵液中的殘余甘油濃度控制為15~25 g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（1）中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中甘油初始濃度為20~80 g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（1）中，所述進(jìn)行發(fā)酵時(shí)將發(fā)酵溫度控制為37℃，攪拌轉(zhuǎn)速控制為100~250 rpm，通過滴加2~6 mol/L的NaOH溶液將發(fā)酵液的pH值控制為7.0。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（2）中，所述噬菌體懸液效價(jià)為1×10⁹~1×10¹⁰ pfu/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟（2）中，所述共培養(yǎng)的條件為在37℃下，以200 ~300rpm的速度搖床培養(yǎng)。